4+蛋白质分子生物学改造和表达.ppt

蛋白质的化学修饰：通过活性基团的引入或去除使蛋白质化学(一级)结构的发生改变的过程。 非必需部分的修饰：不影响蛋白质的生物活性。 必需部分的修饰：影响蛋白质的生物活性 。;;;第一节 蛋白质的分子生物学改造; 对于存在于自然界中的任何蛋白质来说，采用重组DNA技术克隆其基因，在特定宿主细胞中进行表达，可以获得运用于商业用途的纯化的产品。然而，这些蛋白质的理化特性常常不能适应实际需求，这是就需要采取适宜手段对这些蛋白质的理化特性进行改造。; 蛋白质工程设计可以采用定点突变和体外分子定向进化两种方式对天然酶分子进行改造。 定点突变需要知道酶蛋白的一级结构及编码序列，并根据蛋白质空间结构知识来设计突变位点。 体外定向进化是在尚不知道蛋白质的空间结构，或者根据现有的蛋白质结构知识尚不能进行有效的定点突变时，借鉴实验室手段在体外模拟自然进化的过程，使基因发生大量变异，并定向选择出所需性质或功能。 ; 定点突变技术可以随心所欲地在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段。该方法与使用化学因素、自然因素导致突变的方法相比，具有突变率高、简单易行、重复性好的特点。 ;;Step 2: overlap and extension;定点突变的应用一：通过特殊氨基酸的改变提高蛋白的稳定性;定点突变的应用二：通过引入二硫键提高蛋白的