第六章联用技术--公开课件.pptVIP

ESI电离的一个主要特点是可以在大气压下蒸发样 品，离子化过程温和，产生碎片极少，是一种软电 离方法。ESI通常可以得到多电荷分子离子，这对 于测量大分子意义重大。由于大分子可以带10－100 以上电荷，因此，其质荷比大大降低，可用普通质 量测定范围的质谱仪进行生物大分子分析。 图6.8 电喷雾离子化过程示意图 电喷雾的一般理论 ESI放电电压(V0)与表面张力(Ts)、毛细管半径( r)及 针尖与采样板间距离(h)的关系可用下式表示： (6.1) 在实验中虽然并不用它来进行计算，但却可以定性地 帮助理解电喷雾的条件。 ESI产生多电荷离子，在电离过程中，喷雾中颗粒带 电荷数q为： (6.2) 式中：?表示溶液的表面张力常数 ?o表示介电常数 rs表示液滴的半径 电喷雾离子一般每多1000相对分子质量可以多带一 个电荷。 影响ESI过程的因素 由于电喷雾过程非常复杂，影响因素有： 离子化与否主要与被分析分子的pKa值和溶液的 pH有关； (2) 喷雾状态与表面张力和黏度有关，另外，与是否 有气动辅助喷雾也有关(喷雾量较大时)； (3) 去溶好坏与干燥气体的温度和流量有关，并与溶 剂的蒸发热?Hvap有关； (4) 离子的解吸与它的溶解热(气态)有关； (5) 气相反应与质子亲和势和电荷交换速度有关。 图6.9 电喷雾质谱仪 图6.10 典型的电喷雾质谱图 ESI电离的优点是： 被检测分子变成气相离子时没有受到外部能量的激发，因 而不会发生裂解，没有碎片峰，因此谱图解析相对简单； (2)对于多级质谱，通过碰撞诱导裂解（CID）可以产生碎片， 从而提供分子的结构信息。电喷雾质谱不仅能够产生多电荷离 子、对某些极性合物电离效率高（对蛋白质接近100 %），而 且具有软电离等特性，因而成为极性化合物（包括溶液中的离 子），热稳定性差和高分子量化合物分析最有效的工具之一。 (3)在常规电喷雾电离技术中，喷雾过程容易形成较大液滴，液 滴中的样品分子不能完全离子化，因而降低了样品的利用率和 质谱检测灵敏度。近几年发展起来的纳升电喷雾方法 (Nanospray)，采用内径为10 μm左右的喷针，样品注入到喷针 的喷口，在喷口前端产生喷雾，喷雾液滴比常规电喷雾产生的 小100倍，这样可以使样品被充分利用，并有效离子化。与常规 电喷雾电离技术相比，Nanospray流量极低，样品消耗量极少， 灵敏度可以达到fmol。 作业9： 质谱的特点可用4S表示，它们分别是什么？ 叙述MALDI和ESI的原理。 为什么讲生物质谱是蛋白质组学研究的主要工具？ 6.3 液相色谱－质谱联用 作为化学领域最强有力的分离分析技术之一，自上世纪70年代以 来，高效液相色谱（HPLC）得到了迅速的发展，无论在色谱基 础理论，还是在仪器性能方面都得到了很大程度的提高和完善。 随着应用领域的不断拓展， HPLC在环境分析、生化分析、医药 分析和药物质量控制等方面的应用也越来越广泛，尤其是随着生 命科学研究的不断深入， HPLC已经成为一种极为重要和必不可 少的分离分析手段。 HPLC虽然在复杂样品分析中显示出很高的分离效率，而且定量 准确，但其定性分析能力却较为薄弱，通常仅仅是根据各组分的 保留特性来定性，这在复杂样品分析中，尤其在未知组分的定性 分析中具有一定的难度（可信度差和无标准品）。 6.3.1 概述 然而，随着一些新的定性分析手段的出现，尤其是质谱仪器的 发展，对一些组分相对简单的样品进行定性分析已经变得比较 容易。 质量是物质的固有特征之一，质谱分析中，表现为不同荷质比 的化合物对应不同的离子谱峰，由此，根据质谱分析结果可以 获得被分析物的分子量，从而实现对各物质进行定性分析，另 外，离子谱峰的强度与其所代表的化合物含量有一定关系，所 以，利用这一点可以对各物质进行半定量分析。 质谱分析虽然具有灵敏度高、鉴别能力强等优点，但是由于离 子抑制效应等的影响在复杂样品定性分析中却具有一定困难。 由此可以看出，如果把HPLC分离和质谱分析有机结合起来，充 分发挥它们各自的优点，取长补短，就可以有效的对复杂样品进 行定性和定量分析，因此， HPLC -质谱联用技术逐渐被广大科 研工作者所关注。 液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）的研究始于20世 纪70年代，90年代以后，由于大气压电离技术的出现 和成功应用以及质谱本身的发展，液相色谱与质谱的 联用得到了极大的重视和发展。液相色谱-质谱联用技 术将液相色谱的高分离效能和质谱的高灵敏度及较强 的结构解析能力有机的结合在一起，样品经过液相色 谱分离后，借助质谱分析结果进行鉴定，开辟了复杂 样品分离和检测的