二液相色谱方法建立和优化课件.ppt

二)液相色谱方法建立和优化;液相色谱的应用以及方法开发;提纲：;一.HPLC的广泛应用;HPLC的广泛应用;HPLC的应用领域;HPLC的应用领域;HPLC的应用领域;HPLC的应用领域;二.方法开发的过程;第一步干什么?;分析时要了解哪方面的情况？;分离(制备)时要了解哪方面的情况？;使用文献方法注意点;一个完整的方法包括;液相色谱实验所需的基本参数;一个完整的方法举例;1）选择HPLC检测器;选择液相色谱的检测器;理想的HPLC检测器;灵敏度：信噪比;选择液相色谱的检测器;吸光度（ UV/Vis）检测原理;吸光度（ UV/Vis）检测的应用;光电二极管矩阵（Photo Diode Array） ;光电二极管矩阵检测器（ PDA ）的特点和用途;荧光（Fluorescence）检测原理;荧光检测器原理;荧光检测器的应用;示差折光（Refractive Index）检测; 示差折光（RI ）检测 的原理;示差检测器的应用;蒸发光散射（ELSD）原理;ELSD － 优点及应用领域;ELSD － 缺点;2）色谱柱选择;;色谱柱: 如色谱图, 5-μm 规格: 150 mm x 4.6 mm 流动相: CH3CN/25 mmol/L 磷酸盐, pH 3.3(60/40 v/v) 温度: 30oC 流速: 1 mL/min 进样量: 5 μL 检测: UV, 206 nm;3）反相色谱及流动相;流动相极性;流动相洗脱强度;流动相的选择原则;常用流动相;缓冲盐的选择;0,0;MeOH vs. ACN;系统压力与流动相粘度直接有关;流动相比例;流速对分析结果的影响;0;4）方法开发的具体步骤;反相色谱的方法开发;改变容量因子 K’;同样强度的不同溶剂，改变了流动相α值 改变色谱柱;离子型化合物的色谱分离;离子抑制色谱;离子抑制色谱实例;流动相缓冲液pH值从pH 4.95到pH 4.45递减时，氨基酸衍生物的保留和分离呈2种变化趋势 ;离子抑制色谱的使用范围;离子对色谱法;离子对反相 HPLC 分离强酸和强碱; 抗组胺及减充血剂药物的分析;08年问题奶粉中三聚氰胺---8.5mg/kg25cmC8柱 PH4.1;09年奶粉中三聚氰胺---0.18mg/kg 25cmC8柱 PH4.1;方法开发的其他因素;色谱方法转换;;分析方法快速转换;Phenylalkane C1 - C5 , Uracil Prontosil 120-C18-AQ 80/20 (v/v) ACN/H2O1mL/min, 20°C 10 μl, 254 nm;5）液相色谱方法开发;液相色谱泵;梯度的洗脱方式;梯度滞后：系统体积的影响;梯度滞后大小的影响;色谱柱反压变化对梯度实验的影响;梯度洗脱的特点;一般流出???题;Analytical Education Center;梯度运行中发生了什么?;梯度方法开发- 优化溶剂梯度;梯度形状;Analytical Education Center;0;梯度平衡时间的影响（一）;梯度平衡时间的影响（二）;;结论;开发液相色谱方法的考虑因素