3种碱性染液对显微捕获联合低体积扩增技术的影响.pdfVIP

重庆医科大学学报2011年第36卷第5期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2011．Vol36No．5) 一 589一 拢 与I1．舀鼓文章编号：0253—3626(2011)05—0589—03 3种碱性染液对显微捕获联合低体积扩增技术的影响 朱 典 ，万立华 ，胡 兰z，李彩霞z，韩俊萍 ，，郝建文 (1．重庆医科大学基础医学院法医学教研室，重庆 400016；2．公安部物证鉴定中心法医遗传学重点实验室； 3．中国人民公安大学刑事科学技术系，北京 100038；4．重庆市公安局技术处法医科，重庆 400042) 【摘 要】目的：比较3种碱性染液对显微捕获联合低体积扩增 (Lowvolumepolyrmerasechainreaction，LVPCR)技术的影响，为 细胞分离检验中细胞核标记物的选择提供依据。方法：显微捕获联合LVPCR中，用苏木素、龙胆紫、亚甲基蓝 3种染液对口腔上 皮细胞进行标识。参照龙胆紫染色法，比较0．5、1、2、5、8 I苏木素染液及 2、5、8、10、15 l亚甲基蓝染液的染色效果，优化染色 条件 ；并比较优化后的细胞核标识效果。显微操作仪捕获3种染液染色后的细胞进行DNA检验，比较检测结果 ；并捕获染色 10、30、60min口腔上皮细胞，比较染色时间对DNA检测结果的影响。结果：100Ixl口腔上皮细胞悬液加入2 l苏木素、0．5 l龙 胆紫或5 l亚甲基蓝染液，细胞核均着色明显，与胞浆对比清晰。5个细胞的分离检验结果示有效分型率分别为90％、100％、 66．7％，成功分型率为20％、100％、11．1％；龙胆紫、苏木素染色时间(≤60min)对DNA检测结果无明显影响，而亚甲基蓝染色 时间延长导致等位基因丢失等现象加重，影响检测结果。结论：3种染液均可清晰标识细胞核；而龙胆紫染液对LVPCR技术抑 制最弱，为三者中较优的细胞核标记物。 【关键词 】法医物证学；碱性染料；低体积扩增；显微捕获单细胞分离检验技术 【中文图书分类法分类号】R89；D919．2 【文献标志码 】A 【收稿 日期 】2010—12—15 ComparativestudyofthreebasicdyesinmicrOmanipuIatiOnandLVPCR ZHUDian，WANLi—hua1，HULo11,2LICai—xia2，HANJun-pinf，HA0Jian—wen (j．DepartmentofForensicMedicine，CollegeofBasicMedicine，ChongqingMedicalUniversity；2．Forensicand GeneticsKeyLaboratory，InstituteofForensicScienceMinistryofPublicSecurity；3．DepartmentofCriminal ScienceandTechnology，ChinesePeople’sPublicSecurityUniversity；4．ForensicSectionofTechnology Division，ChongqingPublicSecurityBureau) 【Abstract】Objective：TocomparetheeffectofhtreebasicdyesinmicromanipulationandLVPCRinordertosetthegroundforhtechoice ofnucleusstain．Methods：Oralepithelium cellwassatinedusingHaematoxylinsolution，GentianvioletsolutionandMehtylhtioninechlo- ridesolutionwithhtetechniqueofmieromanipulationandLVPCRSystem．BasedonGentianvioletstain—method，theeffectof0．5，1，2，5 txland8 lHaematoxylinsolutionand2，5，8，1O land15 lMethyhhioninechlorideso