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第十四章 基 因 诊 断 和 基 因 治 疗Gene diagnosis and Gene Therapy第一节 基因诊断第二节 基因治疗  第一节 基因诊断 重组DNA技术极大地丰富了我们对人类遗传病分子病理学的知识，同时也提供了从DNA水平对遗传病进行基因诊断的手段。 基因诊断：就是利用DNA重组技术从DNA 水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷，又称DNA分析法。 一、直接诊断 直接检测致病基因本身的异常。通常使用基因本身或邻近的DNA序列作为探针，或通过PCR 扩增产物，以检测基因点突变、缺失、插入等异常及性质。它主要适用于已知基因异常疾病 的诊断。 1、Gene 缺失遗传病的诊断 以αGene为探针，Southern blot 方法检测 αα/αα αα/α- αα/- - α- /- - - - / - - 正常 缺1 缺2 缺3 缺4 2）DMD/BMD的缺失诊断（进行性肌营养不良或假肥大型） DMD是一种严重致死性疾病（XR），临床症状表现肌肉进行性萎缩和乏力。BMD临床症状与DMD相似，但症状较轻。 Gene 定位Xp21 ， Gene 2300kb,79 个Exon ，cDNA全长13974bp 编码3685 Aa，分子量427kD。 DMD/BMD 70%左右为缺失型，基因很大，缺失可能发生在不同的部位。应用多重PCR扩增检测，判断缺失状态。 多重PCR扩增后电泳检测结果 2、突变型遗传病的基因诊断 例 如： 镰形细胞贫血的Gene诊断 已知突变基因编码β珠蛋白链的 第6位密码子 GAG——GTG 谷Aa——缬Aa 1）RFLP诊断 已知限制酶MstII 识别序列 MstII 1.15kb CCTG AGG 1.35kb x probe CCTGTGG 突变后不能识别， 酶切位点消失，限制酶切片段长度发生变化。 限制酶切片段电泳后，经Southern Blot检测，结果： 1.35kb 1.15kb  βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 正常 镰状 镰状贫血 2）ASO探针诊断 已知突变Gene部位和性质，合成寡和苷酸探针，32P标记，进行Southern Blot 杂交/斑点杂交。 Normal βΑGene Probe——与正常 βΑ杂交 Mutation βS Gene Probe——与异常 βS杂交 斑点杂交结果： βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 正常探针 突变探针 二、间接诊断 主要通过Gene和DNA多态的连锁分析作出诊断。当致病基因虽然已知，但其异常尚属未知时，或疾病Gene本身尚属未知时，可通过对受检者及其家系进行连锁分析，推断受检者是否获得了带有致病基因的染色体或DNA 片段。 连锁分析是基于遗传标记与Gene连锁，子代是否获得遗传标记间接地判断做出诊断。 这些遗传标记是基因组中的DAN 多态，如：RFLP，VNTR 等。 1、Gene异常不明确的遗传病的诊断 例：成年型多囊肾病——APKD，AD ，临床表现为腰痛，蛋白尿，血尿，高血压，肾盂性肾炎，肾结石。最终导致肾功能衰竭和尿毒症。 APKD——Gene定位16p13，但致病基因尚未克隆，基因产物的生化性质和疾病发病机理也尚未阐明，但已证实APKD Gene与α珠蛋白基因3`端附近的一段小卫星DNA序列（3`HVR）紧密连锁，