第八章核酸的体外扩增与基因芯片技术.pptVIP

第八章 核酸的体外扩增与 基因芯片技术 主讲教师： 熊伟 副教授/博士 pfu DNA 聚合酶 耐热 5’?3’DNA聚合酶活性 3’→5’外切酶活性 精确度：pfu Taq 但pfu扩增效率通常比Taq酶略差 文献报道：Taq+pfu 会起到较好效果 模板可以是DNA，也可以是RNA。RNA逆转录成cDNA再进行正常的PCR循环。 标本取材： 病原体：病毒、细菌、真菌等 病理生理：细胞、血液、尿液等 法医：血斑、精液、毛发 PCR反应的步骤 ⑴ 在微量离心管中，加入适量的缓冲液，微量的模板 DNA，人工合成的两个DNA引物，四种脱氧单核 苷酸（dNTP），一种耐热的多聚酶和Mg2+。 ⑵ 将上述溶液加热，使模板DNA在高温下（如95℃） 变性，双链解开为两条单链； ⑶ 然后降低反应温度，使两条引物在低温下（55℃） 分别与两条模板互补退火，形成局部双链； PCR实验中应注意的事项 防止样品的污染和结果的假阳性： 分装试剂，减少重复取样 采用一次性吸头 无菌操作 实验对照：阳性对照、阴性对照、试剂对照 完整的探针：5′端荧光基团吸收能量后将能量转移给临近的3′端荧光淬灭基团（发生荧光共振能量转移） 变性 (95oC) 5