第四章第五节糖化酶.pptVIP

第四节 葡萄糖淀粉酶 葡萄糖淀粉酶[Glucoamylase,系统名为淀粉a-1，4葡聚糖葡萄糖水解酶， a-1，4 –Glucan glucohydrolase（EC 3.2.1.3）]，它被大量用作淀粉糖化剂，习惯上简称糖化酶。 一、葡萄糖淀粉酶的性质 1、糖化酶的一般性质 糖化酶的适宜为pH 3.5-5.0，最适pH为4.5，适宜的催化反应温度 50 ℃ ～ 60℃，最适温度为60℃。 2、糖化酶生产菌种及其酶系 工业上用得最广的菌种为：根霉、黑曲霉、泡盛曲霉、根霉等。由此可见霉菌是生产糖化酶的主要生产菌种。 各种菌种麸曲抽提液水解可溶性淀粉的酶活性 3、糖化酶的类型： ① 多数黑曲霉产生的糖化酶水解淀粉到80%便终止作用，而大多数的根霉糖化酶可以水解到100%，前者称为黑曲霉型糖化酶，后者称为根霉型糖化酶，这两类糖化酶对各种底物的水解能力有很大差异。 ②黑曲霉糖化酶的耐酸性及耐热性比米曲霉强 4、淀粉中磷酸根对糖化酶活性的影响 根茎植物淀粉分子中含有较多的磷酸，妨碍了曲霉型糖化酶的糖化力。 根茎植物（如马铃薯）淀粉分子中的磷酸，主要以葡萄糖-6-磷酸或其它形式存在。曲霉型糖化酶水解淀粉时，其中有一部分淀粉只能生成极限糊精，而大大影响淀粉的水解率。若将糖化酶与a-淀粉酶、磷酸酯酶一起作用，则随着游离磷的增加黑曲霉型糖化酶照样可以将淀粉水解进行到底。因此可以认为黑曲霉和根霉这两类糖化酶的水解力之所以不同，原因之一是淀粉中含有磷酸酯键。单独用糖化酶与磷酸酯酶，不能水解马铃薯糖化极限糊精，但在a-淀粉酶存在时，可使之成为小分子含磷糊精，经磷酸酯酶脱酶和糖化酶作用而水解。 5、生淀粉的水解力 黑曲霉糖化酶可分为能被淀粉吸附的糖化酶Ⅰ和不被吸附的糖化酶Ⅱ两个部分。 前者能将糯米淀粉和糖原β-极限糊精100%水解，而且可水解生淀粉； 而后者对糯米淀粉的水解弱，其水解分枝更多的糖原β-极限糊精的能力更弱。根酶糖化酶对生淀粉水解力和吸附力较强。 （提示：糯米淀粉含较多的支链淀粉） 二、影响糖化酶生产的因素 1、菌种繁殖方法对产酶的影响 培养基：保存菌种的斜面培养基对产酶与孢子形成有影响。 Novo公司报道将黑曲霉在麦芽汁斜面保藏传代6次后糖化酶活性下降50%，但若在察氏斜面反复移植时，糖化酶活性仍保持不变，只是孢子形成能力随着传代次数增加而减少。 因此，交替使用两种斜面，不仅孢子密集，糖化酶活性也可以保持原有水平。 培养温度：将黑曲霉接种在察氏培养基中，34℃培养具有形成孢子的能力，而升高温度无论孢子着生还是糖化酶活性的生产均无影响，因此认为用察氏斜面时，采用30℃培养为宜。 2、促进剂的效果 许多研究表明，向黑曲霉或根霉培养基中添加少量某些物质可促进产酶。如 ① 0.1%糖酯，或Span等分子中以-OH基为主的含硫疏水性基团。 ② 脂肪酸和酯类 ③ 0.01%植酸质、植酸钙、肌醇以及谷氨酸等氨基酸。 ④ 微量元素：钼盐、铬盐等。 3、去除葡萄糖苷转移酶的方法 由于葡萄糖苷转移酶严重影响葡萄糖收率，异麦芽糖还有碍葡萄糖的结晶，因此我们研究用以下方法去除转苷酶。 ① 调节pH法：调节pH使转苷酶失活的最简便方法。 因为无论是哪一种糖化酶，它们的最适pH值均为酸性，黑曲霉C-5-11为4.5，黑曲霉165为3～3.5。 一般当pH值倾向中性时，a-淀粉酶、转苷酶活性高，而糖化酶活性低； 当pH值倾向于酸性时，糖化酶活性高，而另两种酶的活性降低。 在实际操作中 若发酵液中盐分浓度低，则可在pH 2以下,在室温放置使转苷酶失活； 若发酵液中无机盐浓度达0.5M，pH过低或时间过长也会引起糖化酶的失活。可将发酵液调节pH 2.25-2.75，5℃放置7天可去除转苷酶. ②吸附法：向发酵液中加入非水溶性的试剂，依靠分子之间的吸附作用将转苷酶除去。 该法选择性差，易造成糖化酶的损失。如黑曲霉7的发酵液，在pH 2.5-2.8，4% 酸性白土处理，糖化液的DE由86.9%升到96%，但糖损失了10-20%。 常用吸附剂有MgSiO3 、硅藻土、蒙脱土（Mg.Ca AlSiO5O16） ③加入表面活性剂 常用试剂为烷基苯磺酸钠、木素、单宁酸等，能有效去除转苷酶。 如在黑曲霉发酵液在pH 2-4，加入0.01-0.5% 十二烷基硫酸镁、二辛基琥珀酸磺酸钠等，15-40℃处理数分钟可除去转苷酶。 ④杂多酸活高分子共聚物沉淀法 杂多酸是磷钼酸、磷钨酸、磷钒酸、硅钼酸、硼钨酸、硼钒酸、硅钨酸、硅钒酸或它们的混合物。 处理时，当pH低于2.5则糖化酶也被沉淀，pH高于3.5，则无