分子荧光光谱法课件.pptVIP

③溶剂 溶剂极性增加，有时会使荧光强度增加，荧光波长红移。 若溶剂和荧光物质形成氢键或使荧光物质电离状态改变，会使荧光强度、荧光波长改变。 含重原子的溶剂（碘乙烷、四溴化碳）使荧光减弱，磷光增强。 ④溶解氧 往往使荧光强度降低。 Ⅲ、荧光分析仪 测量荧光的仪器主要由四个部分组成： 激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 I0 I F 光源： 最常用的是高压汞蒸气灯。发出的是较强的线状谱，其中365，398，436，546，579，690，734nm谱线较强。大多数荧光化合物都可以在一定波长范围内用不同波长的光诱发荧光，因此通常至少有一条汞线是适用的。 高压氙灯发出的光线强度大，而且是连续光谱，克服了汞蒸气灯射线数目少、强度差别大的缺点。但氙弧灯热效应大，稳定性较差。 高功率连续可调激光光源是一种新型荧光激发光源。激光的单色性好、强度大。激光光源近年来应用日益普遍。 钨灯和氢灯发出的紫外光强度太小，在荧光中应用不多。 单色器： 第一单色器——选择激发光波长λ1 （＞250nm的紫外光），称为激发单色器。 第二单色器——选择(测量)发射光（荧光）波长λ2 ，与激发光入射方向垂直，称为荧光单色器。 样品池： 采用低荧光材料，通常为石英池。 检测器： 光电倍增管。 Ⅳ、荧光法的应用 荧光法灵敏度高、选择性好，可用于痕量分析，但是能产生荧光的物质较少，使其应用范围较小。 * 分子荧光光谱法 荧光是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。 光致发光 　 物体依赖外界光源进行照射，从而获得能量，产生激发导至发光的现象。它大致经过吸收、能量传递及光发射三个主要阶段，光的吸收及发射都发生于能级之间的跃迁，都经过激发态。而能量传递则是由于激发态的运动。紫外辐射、可见光及红外辐射均可引起光致发光。如磷光与荧光。 光致发光最普遍的应用为日光灯。它是灯管内气体放电产生的紫外线激发管壁上的发光粉而发出可见光的。其效率约为白炽灯的5倍。 磷光是一种缓慢发光的光致冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线）照射，吸收光能后进入激发态（具有和基态不同的自旋多重度），然后缓慢地退激发并发出比入射光的的波长长的出射光，而且与荧光过程不同，当入射光停止后，发光现象持续存在。发出磷光的退激发过程是被量子力学的跃迁选择规则禁戒的，因此这个过程很缓慢。 分子荧光光谱法的特点 ①灵敏度高 荧光分析是由试样溶液所发生的荧光的强度来测定试样溶液中荧光物质的含量。荧光分析的灵敏度不仅与溶液的浓度有关，而且与紫外光照射强度及荧光分光光度计的灵敏度有关．因此荧光分析的灵敏度高于一般的分光光度法．最低检出限比分光光度法低一个数量级以上，适合于痕量物质的检测。 ②选择性好。 凡是会发生荧光的物质首先必须会吸收一定频率的光，但会吸收光的物质却不—定会产生荧光。对于某一给定波长的激发光，产生荧光的物质发出的荧光波长也不相同，只要控制荧光分光光度计中激发光和荧光单色器的波长便可得到选择性良好的方法． ③能够引起荧光的化学物质较少，应用范围小。 大多数物质本身不会产生荧光，一些物质在加入某种试剂后能够产生荧光。 分子荧光产生机理 荧光光谱是物质分子吸收紫外光后产生的分子发射光谱。 2.跃迁类型 分子中原子的电子能级跃迁，伴随振动能级的跃迁。 1.光谱类型 3.分子的激发与失活 （1）分子的激发 基态→激发态(S1、S2、激发态振动能级)：吸收特定频率的辐射，跃迁一次到位。 激发态→基态：多种途径和方式，速度最快、激发态寿命最短的占优势。 单重态： 一个分子中所有电子自旋都配对的电子状态。 三重态： 有两个电子的自旋不配对而平行的状态。激发三重态能量较激发单重态低。 大多数有机物分子含有偶数电子，这些电子成对且自旋方向相反地存在于各个原子或分子轨道上。所以大多数分子在基态时处于单重态。 当分子受光照射时，若光子能量恰好等于分子的某两个能级的能量之差，则分子吸收光子并从基态跃迁到第一激发态或更高的激发态中的某个振动能级。但其自旋方向不会立刻改变，分子仍处于单重态。持续一段时间后，激发态电子的自旋可能倒转，生成三重态。 单重态能级间的跃迁符合光谱选律，跃迁概率