第一章-基因和基因组.pptVIP

蛋白基因鉴别标准 1 开放阅读框架（open reading frame,ORF) 始于起始密码子并终于终止密码子的一串密码子组成的核苷酸序列 2 密码子偏爱 3 序列保守性 4 转录产物 5 基因失活 基因总数 基因组中基因数目与生物进化程度和复杂程度的不对称性——N值矛盾（N value paradox) 基因大小 基因组中基因大小（bp）与生物进化程度和复杂程度的不对称性——C值矛盾（C value paradox) 基因组计划 以获得某物种基因组全序列为主要目标的科学计划——基因组计划 基本原理：人类基因组DNA ? 打碎 ? 拼接 人类基因组计划（human genome project,HGP) 遗传图谱(genetic map)（连锁图 linkage map） 用遗传标签确定基因排列顺序 物理图谱（physical map) ：确定排列距离 序列图谱(sequence map)：碱基排列顺序 基因组学(genomics) 对所有基因进行基因组作图，核苷酸序列分析，基因定位和基因功能分析的一门科学。 结构基因组学（structural genomics) 以全基因组测序为目标 功能基因组学（functional genomics) 以基因功能鉴定为目标 功能基因组学——后基因组计划 掌握下列概念 基因 结构基因 基因组 基因组学 开放阅读框架 HGP 第二章 原核生物基因组特征 ② 操纵子结构是原核生物基因组的功能单位 ③ 结构基因通常以单拷贝形式存在  rRNA及tRNA基因多拷贝 ④ 基因连续，基因内没有内含子（古细菌除外） 质粒的理化性质 具有核酸分子的一般理化特性： 可嵌入某些染料（溴化乙锭,EB）(Syber Green) 具有较强的抗切割和抗变性的能力 质粒的特征(p79) 1. 结构为环状超螺旋DNA分子 2. 自主复制性 3. 不相容性 4. 可扩增性 5. 可转移性 6. 带有选择性标记 感受态细胞(competent cell) 细胞膜结构改变、通透性增加并具有摄取外源DNA能力的细胞称谓感受态细胞(competent cell)。 常用低渗的(0.1%)CaCl2洗涤受体细胞制作成感受态细胞。 CaCl2法 酶基因标记 载体中装入一个来自大肠杆菌乳糖操纵子的DNA片段（lacZ?基因），该基因编码?-半乳糖苷酶氨基端的一个片段，异丙基-?-D-硫代半乳糖苷（IPTG）可诱导此片段合成，而此片段能与宿主细胞所编码的缺陷型?-半乳糖苷酶实现基因内互补（?-互补），形成完整的?-半乳糖苷酶。?-半乳糖苷酶能催化指示剂底物5-溴-4-氯-3-吲哚-?-D-半乳糖苷（X-gal ）形成蓝色菌落。如lacZ?基因中含有MCS，当外源基因插入MCS，lac ?-肽基因阅读框架被破坏，细菌内将无?-半乳糖苷酶活性，菌落呈白色。 半乳糖苷酶的蓝白斑筛选实验： 二、质粒 2.质粒命名的原则 用小写字母p代表质粒，在p字母后面用两个 大写字母代表发现这一质粒的作者或实验室名称。 pUC118 plasmid 编号 发现者名字 二、质粒 质粒的不相容性 同一类群的不同质粒通常不能在同一菌株内稳 定共存，当细胞分裂时就会分别进入不同的子代细 胞，这种现象叫做质粒的不相容性。 不同群的质粒（如F和ColEⅠ）可以在同一菌株 内稳定共存，这些质粒具有相容性。 二、质粒 3、质粒的分类 复制机制 严紧型 松弛型 功能 F质粒（性质粒） R质粒（耐药性质粒） Col质粒（大肠埃希菌质粒） 转移方式 接合型 可移动型 自传递型 大小 小型(1.5kb～15kb) 大型(60kb～120kb) 宿主范围 窄宿主谱型 广宿主谱型 质粒的转移 分子量在2.5×107Da以上的质粒可以从供体细胞将 一个复本转移给受体细胞，如F质粒和R质粒。 分子量在1×107Da以下的质粒一般无自我转移能力。 二、质粒 转化--将质粒或以质粒为载体的重组DNA分子导入细菌，使其在细菌体内扩增及表达的过程称为转化(transformation) 重组质粒 细 菌(CaCl2处理） 细 菌(CaCl2处理） 质粒导入未成功 质粒导入成功 质粒导入不成功 当细菌处于0℃、二价阳离子低渗溶液中时，细 菌细胞膨胀成球形，处于感受态