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一、激光医学的发展简史 二、激光技术在医学中的研究领域 1. 点照明 2. 具有照明pinhole和探测pinhole 3. 照明pinhole和探测pinhole共轭（共焦）, 共焦点即被探测点，被探测点所在的平面为共焦平面 4. 具有扫描系统 —— 逐点扫描成像 5. 具有多个（四个） 荧光通道，可同时探测多个 被标记物 人眼分辨率： 0.2mm 光学显微镜分辨率：0.25mm 电子显微镜分辨率：0.2nm 共焦显微镜分辨率：0.18mm * 第二节 激光技术在医学中的应用 一、激光医学的发展简史 二、激光技术在医学中的研究领域 Light amplification by stimulated emission of radiation 1917年，爱因斯坦的著作《关于辐射的量子理论》 台激光器的诞生 1960年7月7日，美国人Maiman宣布了世界上第一 60年代，激光医学基础研究阶段 70年代，临床研究试用阶段 80年代，激光医学学科形成阶段 90年代，激光医学学科发展成熟阶段 我国激光医学的发展简况 1961年，我国研制成第一台红宝石激光器 1963年，研制成He-Ne激光器、钕玻璃激光器等 1965年，研制成大功率CO2 激光器 1968年，研制成大功率Nd:YAG固体激光器 1972年，研制成第一台CO2 激光治疗仪 1973年，研制成国内第一台Ar+ 激光眼科治疗机 1974年，研制成国内第一台Nd:YAG激光治疗机 1982年，研制成国内第一台激光流式细胞计 1. 光学存储器 2. 生物芯片 光学信息处理 1. 激光显微方法 2. 激光生物传感技术 激光光学计量技术 1. 激光流量细胞仪 2. 环境分析 3. 用激光诱导的荧光区分细胞… 4. 光学动力学肿瘤诊断和治疗 组织和复杂生物系统 （宏观等级） 1. 分子系统的结构… 2. 短时间激光检测 3. DNA顺序排列 4. 细胞光化学 5. 激光质谱 细胞和亚细胞粒子 （微观等级） 激光分析、检测 1. 光学镊子 2. 激光显微加工 激光控制 激光技术在生命科学中的研究领域 1. 激光显微加工 紫外激光显微辐射仪 可嫁接和切割生物组织 能在细胞内进行外科手术 应用： （一）激光控制 2. 光学镊子 红外激光辐射 细胞分类 细胞生理学，测量动态分子 应用： 激光显微切割仪 激光显微切割（Laser micro-desection） 特点： 具体方法： ① 激光微光束微切割 ② 激光加压弹射 ③ 贴于膜上的原组织微切割 ④ 激光俘获微切割 效率高，整个过程仅需2~3min或数sec 精度高 1. 宏观分子系统的结构、动力学过程 激光多普勒频移 激光喇曼光谱 确定粒子的运动速率分布 给出宏观分子的结构 应用： （二）激光分析与检测 2. DNA顺序排列 激光流量细胞仪（ Flow Cytometer，简称FCM） 测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集的高技术。 激光流式细胞仪的结构 （1）流动室及液流驱动系统 （2）激光光源及光束成形系统 （3）光学系统 （4）信号检测、存储、显示与分析系统 （5）细胞分选系统 喷嘴 Fluorescence signals Focused laser beam 鞘液 液流系统示意图 FCM的液流系统（如何形成单个细胞流） 样本管 鞘液管 Flow Tip Laser SS and FL Detector FS Detector 光学系统示意图 前向散射与被测细胞的大小有关 侧向散射反映细胞膜内精细结构和颗粒性质 荧光信号：细胞内生化成分含量、细胞表面 抗原、细胞的分选 基本工作原理 流式信号检测、存储 、显示、分析示意图 简单，单参数 多参数，综合分析 结果 人工，200 计算机，5000 统计 目镜×物镜、光学放大 PMT、放大电路 放大方式 形态及染色 光学信号 检测信号 载玻片 鞘液及流动室 承载工具 细胞、组织等 细胞、生物粒子 对象 自然光、灯光 激光 光源 显微镜 流式细胞仪 区别 流式细胞仪与显微镜的区别 激光流式细胞仪的特点 分析速度快： 速度高达 5000~10000 个细胞/秒 分析灵敏度高： 细胞间 5% 的差别可区分 分选纯度高： 纯度高达 99% 以上 可多参数分析 适当条件下，对活细胞可进行无损分析和分选 激光流式细胞仪的应用 细胞生物学研究 用于细胞大小、细胞核/浆比 例、DNA、RNA、蛋白质、线粒体等定量测定， 细胞形态学、染色体核型分析、细胞增殖周期定 量分析。 FC