高二生物选修3基因工程的原理和技术课件.pptVIP

请根据以上图表回答下列问题。 （1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的 DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要 的特点是 。 （2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数 量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2 为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高 的退火温度？__________。 （3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱 基序列是否有专一性要求？ 。 （4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的 细菌B通常为 。 耐高温 引物对B 否 农杆菌 （5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。 ①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 ②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 2 1 * * 基因工程的原理和技术 基因工程的基本操作步骤 1、获得目的基因 2、形成重组DNA分子 3、将重组DNA分子导入受体细胞 4、筛选含有目的基因的受体细胞 5、目的基因的表达 一、获得目的基因 从基因文库中寻找 聚合酶链式反应（PCR）扩增 化学合成法 目的基因的核苷酸序列未知 目的基因的核苷酸序列已知 基因组文库 部分基因文库 基因组DNA文库 cDNA文库 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，菌中含基因 利用PCR提取目的基因 PCR：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 原理：DNA双链复制 原料：模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子 PCR的基本原理 类似于DNA的体内复制。首先待扩增DNA模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环，PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。 前提: 已知目的基因的脱氧核苷酸序列 方法：DNA受热变性解旋为单链、冷却后DNA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。 指数增长 归纳 Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus) 酶活性(%) 温度(℃) 40 50 60 70 80 90 100 100 80 60 40 20 72℃ 94℃ 55℃ PCR循环 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温度 （℃） PCR反应 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA变性 形成2条单链 子链延伸 DNA加倍 模板DNA 95℃ PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 50℃ 引物1 引物2 DNA引物 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 引物1 引物2 DNA引物 72℃ Taq酶 Taq酶 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 72℃ 第1轮结束 第2轮开始 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 95℃ 50℃ 72℃ Taq Taq Taq Taq PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 72℃ 第2轮结束 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 重复30轮后 230=1,073,741,824 模板DNA 第1轮扩增 第2轮扩增 第3轮扩增 第4轮扩增 第5轮扩增 第6轮扩增 理想拷贝数=2n n 循环次数 实际拷贝数=(1+x)n X 平均效率,约为0.85 n 循环次数 从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成 归纳：获取目的基因的方法 2构建载体 形成重组DNA分子 方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。 将重组DNA分子导入受体细胞 导入植物细胞 补充归纳导入方法 （重组DNA分子导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞） 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 导入动物的方法 将目的基因导入动物细胞 显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中） 导入微生物 将目的基因导入微生物细胞 4检测和鉴定 Ca2＋处理受体细胞成为感