显微技术 第二章__非切片法的制作.pptVIP

第二章 光镜标本基本制作技术 生物显微制片有许多不同的方法，一般可分为非切片法与切片法两大类 显微制片技术虽是生物学中很基本的操作技术，但由于生物材料的个体差异，化学试剂的多样性，因此操作技术相当细致而复杂，方法也很多，每一步骤的失误都可导致整体的失败，因此需要耐心细致，不断总结经验，才能得到较好的结果。 第一节 非切片法的制作 整体制片法 涂片法 压片法 解离法 铺片法 ?? 定义：不经过切片，将整个微小或透明的 生物体或器官封藏起来，制成玻片标本的 方法。 ?? 适用范围：低等植物、动物和某些高等植 物和动物材料都可用此法制成临时、半永 久或永久玻片标本。 （一）水封装片法 ?? 浮游植物和浮游动物； ?? 菌类培养液、花粉培养液等； ?? 丝状藻类、菌丝、苔藓、蕨类和昆虫； ?? 可在玻片一侧滴加固定剂或染色剂，并从 另一侧用吸水纸吸，达到固定和染色目的； ?? 水封片出现气泡时不宜再用。 （二）甘油法 ?? 用甘油进行脱水和透明，并把材料封藏于 甘油中，可保存材料的自然颜色。 ?? 先用10％甘油封片，水分蒸发后再滴加20 ％甘油，依次40％、60％、80％、100％ 进行脱水。 (三）永久性整体装片法 ?? 杀生与固定：要根据材料性质选择合适的固定液。 ?? 冲洗：根据固定液的性质选择冲洗剂。 ?? 染色：用酒精溶染色剂染色的材料，必须脱水至相同浓度的酒精。 ?? 脱水透明。 ?? 封藏：树胶封片法 二氧六环树胶法 ?? 贴标签。 3 压片法 一些较幼嫩，柔软的材料可将其置载玻片上， 用小解剖刀将其分散，加染料一滴，再盖上盖 玻片，用拇指垂直用力挤压，使组织散成一薄 片，再进行观察，如植物根尖观察染色体，花 粉粒观察发育阶段等。 4 解离法 借药物的作用，使组织软化、组织各组成部分之间的某些结合物质溶解，或用机械的方法，将组织的各个组成部分分离，并使其摊开于玻片上，制成临时或永久性封片。适用于肌肉，叶片，茎等部位。 * * 1 整体装片法 染色：甲基绿、碘液、1%美兰 一、临时制片 2 涂片法 将一些不需切片的动植物的组织细胞或体液组织（如动物的血液、精液、骨髓等）用机械的方法使其均匀地摊在载片上，再进行固定、染色、观察。 对玻片要求严格 洗液 12h 流水冲至中性 95%Alc 人血液涂片 Blood Smear 2. 涂片方法： 1. 取血： 血滴于一端1/3处 30-40° 用力均匀 血涂片自然晾干 涂片法 第五章 注意： 滴血后马上涂片 推片速度、角度大小与血膜厚薄有关 一张载片只能涂1次 用来推片的载片一边只能用1次 （1） Wright 染色法 （2） Giemsa染色法 瑞氏粉含曙红和亚甲蓝 吉氏粉含曙红和天青 对酸碱敏感！ 天青加热会消失！ 涂片法 第五章 3. 染色 示血涂片不同部位的染色效果