穿刺菌的保存和使用说明书.pdfVIP

穿刺菌的保存和使用说明书 储存 载体在含有冷冻保护剂的穿刺菌中保存，并于室温运输。收到穿刺菌后，可以直接置于-80℃ 中长期保存。如需备份，则需要重新制备甘油菌。若短期储存 （≤2 周），则可直接置于4 ℃ 保存。 接种 穿刺菌来源于单克隆。建议客户收到穿刺菌后，请先在含有相应抗生素的 LB 平板上划线， 带格式的: 字体: 加粗, 字体颜色: 红色 然后挑取一个新鲜的单克隆于含有抗生素的LB 液体培养基中进行培养。操作如下：取一个 带格式的: 字体颜色: 红色 干净的移液器枪头，沿着穿刺管中淡黄色的大肠杆菌生长线插入，来回反复操作几次，每次 都轻微改变枪头的方向，以尽可能的增加枪头与菌的接触面。将沾了菌的枪头在含有相应抗 生素的LB 平板上划线，将平板置于37℃培养箱中过夜培养。次日从LB 平板上挑取一个单 克隆接种到含有相应抗生素的LB 液体培养基中，37℃摇床过夜培养。 带格式的: 字体: 加粗, 字体颜色: 红色 可以直接将穿刺菌接种到含有抗生素的LB 液体培养基中进行培养。但在极少数情况下，这 种操作处理方式会导致从过夜培养物中提取出来的质粒DNA 产量很低。划线挑取单克隆的 方法可以很好地避免这种问题。 含有大片段、重复序列或者是不寻常的GC 含量等序列的载体，可能会存在序列重组（如删 除缺失）的潜在风险。将LB 平板或LB 液体培养基置于30℃培养可以降低这类载体的不稳 定性。 抗生素浓度 载体的抗性标识在穿刺菌的管壁上，请使用以下推荐浓度进行培养。 氨苄青霉素 （Ampicillin ）：100 ug/ml 卡那霉素 （Kanamycin ）：50 ug/ml 氯霉素（Chloramphenicol ）：34 ug/ml 四环素（Tetracycline ）：5 ug/ml 链霉素（Streptomycin ）：50 ug/ml 注意事项 请注意穿刺菌管上标注的大肠杆菌宿主菌的信息，大多数载体构建时所用的宿主菌是有利于 载体序列稳定性的 Stbl3 菌株，而有些应用则需要其他的菌株作为宿主菌。例如， pET 重 组蛋白表达载体需要转入带有T7 RNA polymerase 基因的大肠杆菌，如BL21(DE3) 。有特殊 应用需求的，需要将载体重新转化到合适的宿主菌中。