第七章酶细胞和原生质体的固定化——2.pptVIP

⒈ 固定化细胞的定义 固定在载体上并在一定空间范围内能进行生命活动的细胞。 固定化活细胞能进行正常的生长、繁殖和新陈代谢。 7.7 细胞固定化 2、固定化细胞的适用对象 产胞外酶的微生物细胞 底物和产物分子易通过细胞膜 胞内不存在产物的分解系统和副反应，可通过调节pH 或加热等消除副反应的发生。 3、固定化细胞的特点 细胞特性+生物催化剂+固相催化剂 ① 无须进行酶的分离纯化 ② 保持酶的原始状态，酶回收率高 ③ 比固定化酶稳定性高 ④ 细胞内酶辅助因子可再生 ⑤ 细胞本身含多酶体系 ⑥ 抗污染能力强 7.7.1 细胞固定化的方法 吸附法 包埋法 1、吸附法 酵母细胞：pH3-5多孔陶瓷 植物细胞：中空纤维 动物细胞： 2、包埋法 琼脂凝胶包埋法 海藻酸钙凝胶包埋法 角叉菜胶包埋法 明胶包埋法 聚丙烯酰胺凝胶包埋法 光交联树脂包埋法 固定化微生物细胞的特点 ① 固定化微生物细胞保持了细胞的完整结构和天然状态，稳定性好。 ② 固定化微生物细胞保持了细胞内原有的酶系、辅酶体系和代谢调控体系。 ③ 发酵稳定性好，可以反复使用或者连续使用较长的一段时间。 ④ 固定化微生物细胞密度提高，可以提高产率。 ⑤提高工程菌的质粒稳定性。 7.7.2 微生物细胞固定化 利用固定化微生物生产各种产物 固定化微生物细胞制造微生物传感器 2、固定化微生物细胞的应用 1．固定化植物细胞具有下列特点： ① 提高植物细胞的存活率和稳定性。 ② 被束缚在一定的空间范围内进行生命活动，不容易聚集成团。 ③ 可以简便地在不同的培养阶段更换不同的培养液，利于细胞的生长及生产各种所需的次级代谢物。 ④ 可反复使用或连续使用较长的一段时间，大大缩短生产周期，提高产率。 ⑤ 易于与培养液分离，利于产品的分离纯化，提高产品质量。 7.7.3 植物细胞固定化 吸附法：泡沫塑料、中空纤维 包埋法：多孔凝胶 2、植物细胞固定化的方法 3、固定化植物细胞的应用 1．固定化动物细胞有下列特点： ① 提高细胞存活率 ② 提高产率 ③ 可反复使用或连续使用较长的时间 ④ 固定化细胞易于与产物分开，利于产物分离纯化，提高产品质量。 7.7.4 动物细胞固定化 吸附法：转瓶、微载体、中空纤维 包埋法：凝胶包埋、半透膜包埋 2、动物细胞固定化方法 3、固定化动物细胞的应用 原则：破坏细胞壁分离出原生质体同时不影响细胞完整性，更不能破坏内部结构。 7.8 原生质体固定化 收集对数生长期细胞 悬浮在高渗溶液 加细胞壁水解酶 分离 原生质体 7.8.1 原生质体的制备 7.8.2 原生质体的固定——凝胶包埋法 琼脂-多孔醋酸纤维素固定化法 海藻酸钙凝胶固定化法 角叉菜胶固定化法 光交联树脂固定化法 （1）琼脂-多孔醋酸纤维固定法：用生理盐水配制3％-4％的琼脂，加热，溶解，灭菌后冷至50℃左右，与等体积一定浓度的原生质体混合，将混合液滴加于多孔醋酸纤维上，置冰箱冷却凝固。 （2）海藻酸钙凝胶固定法：以3％-6％海藻酸钠溶液与等体积一定浓度的原生质体混合，混合液滴入CaCl2溶液中，并浸泡1-2h。即成。 （3）角叉菜胶固定法 配制1％-8％角叉菜胶．加热溶解，灭菌后，冷却至50℃左右，与等体积原生质体混合，混合液滴入一定浓度的预冷KCl中，即得球状固定化原生质体。 （4）光交联树脂固定法 配制30％-60％浓度的光交联树脂预聚体．加热溶解后，在50℃左右加人1％光敏刘与等体积的原生质体混合后，摊成薄层经紫外光照射，聚合后形成小块，制成片状的固定化原生质体。 固定化原生质体用于生产各种氨基酸、酶和生物碱等物质以及甾体转化等。 7.8.3 固定化原生质体的特点 细胞结构不完整但保持原有新陈代谢特性 有利于胞内物质的分泌及营养物质的运输和传递 稳定性好 有利于产物的分离纯化 添加渗透压稳定剂 7.8.4 固定化原生质体的应用 1、氨基酸的生产 2、胞内酶的生产 3、生物碱的生产 4、甾体转化 5、木质素降解