第15章高效液相色谱法.pptVIP

2.液相色谱为何能完成难度较高的分离工作？ 原因： （1）HPLC的流动相对组分有亲和力，可通过改变流动相的种类和组成，来提高分离的选择性。而GC所用的载气对组分没有亲和力。 （2）HPLC的类型多，可供选择分析的余地大。 （3）HPLC通常在室温下操作，温度低可有利于提高分离的选择性。而GC一般在较高温度下进行。 15.1.2 液液分配色谱法 目前已很少使用 15.1.3 化学键合相色谱法 CBPC 应用最广 1.化学键合相色谱法的优点 2. 化学键合固定相的类型 3．正、反相键合相色谱法 （1） 离子色谱的检测器 ① 电导检测器(最常用) 原理:基于待测物在某介质中电离后，所产生的电导变化 来测量其含量。 应用：可检测大部分离子型化合物（pKa5） (2)离子色谱柱的类型 阴离子交换柱 阳离子交换柱 离子排斥柱 多维色谱柱 糖柱 氨基酸柱、DNA柱、蛋白柱 (1) 抑制器 15.1.6 尺寸排阻色谱法 (SEC) 又称凝胶色谱或空间排斥色谱。它包括: 组分的分配系数：0 ≤ KSEC ≤ 1大于排阻极限的分子，KSEC＝0 ， VR = V0小于排阻极限的分子，KSEC＝1.0 ， VR = V0 ＋ Vi 由色谱过程基本方程知：VR = V0 +KSEC Vi Vi——凝胶内孔体积（总孔容积） KSEC——分配系数 4．尺寸排阻色谱的应用 主要用于大分子的分离、分级(相对分子质量2000 ~ 2000000) 、研究聚合机理等。 如分离蛋白质、核酸；测定合成高聚物的相对分子质量分布等。 思考：某人用凝胶色谱分离一高聚物，分离情况很差。改变流 动相组成后，分离情况大为改进，该说法对吗？ 4．示差折光检测器 RID 2 .高效毛细管电泳的特点 1. 毛细管区带电泳 2. 毛细管凝胶电泳 3. 胶束电动毛细管色谱（MECC ,MEKC） 原理：利用两束相同角度的光照射溶剂相和样品+溶剂相，利用二者对光的折射率不同，其中一束（通过样品+溶剂相）的光因为发生偏转造成两束光的强度差发生变化，该差示信号与样品的浓度成正比。 特点：为通用型检测器，灵敏度为5×10-7g/mL。 不适合梯度淋洗。 15.3.4 LC检测器 6. 其它检测器 安培检测器、光散射、极谱、质谱等。 表15-2 HPLC中常见检测器的基本特性 主要用于定性和半定量。 可 无 ? 10-10 质谱 可检测所有物质；不适合微量分析；对温度变化敏感 不可 无 104 10-7 示差折光 选择性高；易受流动相pH值和杂质的影响；稳定性较差 困难 有 104 10-10 电化学 是离子性物质的通用检测器；受温度和流速影响；不能用于有机溶剂体系。 不可 有 103-104 10-8 电导 选择性和灵敏度高；易受背景荧光、消光、温度、pH和溶剂的影响。 可 有 103 10-12-10-13 荧光 对流速和温度变化敏感；池体积可制作得很小；对溶质的响应变化大。 可 有 103-104 10-10 紫外-可见光 主要特点 梯度淋洗 选择性 线性范围 检测限/(g/ml) 检测器 15.3.5 记录系统 思考:1. 用液相色谱法分离长链饱和烷烃的混合物, 应采用下述 哪一种检测器?( ) (1) 紫外吸收检测器 (2) 示差折光检测器 (3) 荧光检测器 (4) 电化学检测器 2. 在环境保护中, 常要监测水源中的多环芳烃, 宜采用下述 哪种检测器?( ) (1) 电子捕获检测器 (2) 示差折光检测器 (3) 荧光检测器 (4) 电化学检测器 15-4 高效毛细管电泳 毛细管电泳仪 1. 什么是高效毛细管电泳(HPCE) ？ 它是以毛细管柱为分离通道，以高压电场为驱动力，以电解质为电泳介质，依据样品各组分之间淌度和分配行为上的差异，而实现分离的一类液相分离分析技术。 15.4.1 毛细管电泳概述 + 铂电极 Buffer/Sample Buffer Capillary 高效毛细管电泳装置 (1)高效、快速 理论塔板数105～107块/m ；几十秒～几十分钟 完成分离； (2)经济、环保 进样量极少（nl）；水相分离，对人和环境无害； (3) 多种分离模式，应用范围极广 可在同一台仪器上实现多种分离模式； 离子(?)→小分子→大分子→病