第17章 高效液相色谱法.pptVIP

(3)示差折光检测器（differential refractive index detector） * 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 原理：折射率随介质中的成分变化而变化，连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值，差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 对温度敏感、不能用于梯度洗脱。 * 三. 液相色谱的固定相与流动相 1.液相色谱固定相 高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。 刚性固体以SiO2为基质，可承受7.O× 108 ～1.O×109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在SiO2表面键合各种官能团，就是键合固定相，可扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。 硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。 * 高效液相色谱固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型两大类。 表面多孔型：基体是30～40μm实心玻璃微球，表面附着一层厚度为1～2μm的多孔活性材料，如硅胶、氧化铝等。 表面积小，柱容量低。 全多孔型：由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体； 现采用5～10μm的小颗粒，比表面积和柱容量都很大，是化学键合制备柱填料。 化学键合固定相 化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N 化学键合固定相的特点 1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； 2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； 3）耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； 4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； 5）有利于梯度洗脱； 2.液相色谱的流动相 (1)流动相特性 （a）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况； （b）亲水性固定相常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液相色谱法，极性柱也称正相柱。 （c）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液相色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 (2)流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙 腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 (3) 流动相选择 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) (4)选择流动相时应注意的几个问题 （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱 子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并 在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测 器时，流动相不应有紫外吸收。 * 流动相应具备的条件: 理想的流动相应具备化学稳定性好； 对样品有较宽的溶解范围； 扩散性好即低粘度； 沸点适中； 与检测方法具有好的兼容性； 不损坏固定相和仪器； 易于获得纯品并且毒性低。 四.高效液相色谱法的主要类型 离子交换色谱 尺寸排阻色谱（凝胶过滤色谱） 亲和色谱 分配色谱 吸附色谱（如反相色谱，疏水作用色谱） * 1. 液-液分配色谱 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配系数不同； 固定相：早期涂渍固定液，由于流失，已较少采用； 现在应用最广的是化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到担体（硅胶）表面的游离羟基上。 流动相：流动相与固定相均为液体，但应互不相溶。 * 根据两相极性程