CELL-基本培养方法.pptVIP

细胞培养操作前及操作中应注意事项;一、培养操作前注意 1.培养用物品的灭菌消毒（写出物品清单）。 2.操作台消毒（各物品布局合理进行紫外线消毒30分钟）。 3.洗手和着装（原则上与外科手术相同）。 4.火焰消毒（酒精灯使用、金属器械、吸过培养液的吸管）。 ;二、培养操作中注意： 动作准确敏捷有序； 培养用液开口后应45度倾斜，不再重复使用的应立即封口； 一个吸管只能吸一种液体； 不能面向操作台讲话或咳嗽。;基本的培养方法 悬滴培养方法：;悬滴培养用的凹载玻片 单位：mm;（一）单盖???片培养方法;左图； 凹载玻片支架;8、将密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培养箱内培养 9、培养7-8个小时，组织块向外生长，培养24小时在组织块外周形成生长晕（一圈薄而透明的细胞圈），48小时候生长减慢甚至停止。需要重新加入鸡胚浸出液。 ;盖玻片法再培养 1、2、眼科刀切除生长晕 3 方型培养物切为两到四片 4、5培养物漂洗 6、7、再培养;（二）双盖玻片悬滴培养法; 双盖玻片图解： 1、载体盖玻片 2、带培养物盖玻片 ;与单盖玻片不同之处： 1、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到带有组织块的另一面。 2、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片,可减少污染。 ;二、培养瓶培养方法 20世纪50年代Carrel设计了卡氏瓶 Earle设计了T-培养瓶 ;用血浆固定组织块的培养方法; 图:卡氏瓶培养组织块 1.消毒卡氏瓶 2.火焰略烧瓶口 3.取少量血浆加入瓶底 4.再加等量胚胎浸出液 5.接种组织块 7.上盖 8.消毒 9加入培养液 10.通气;用透明纸固定组织块的培养方法;图:内放有孔透明纸的培养瓶培养 a. 一个T培养瓶内放有有孔透明纸b.卡氏瓶接种后图解 1.有孔透明纸 2.组织块 3.培养液;旋转管培养法： 与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替与培养液和空气直接接触，有利于细胞的生长。;旋转管培养方法用具 a.简易旋转鼓，可放入培养箱内 b.带旋转鼓装置的培养箱 c.培养用的旋转管 1.示血浆的高度 2.示接种组织间间距 3.示加培养液 4.示可放旋转鼓内培养 d.放旋转管的支架.(1.接种组织块时用 2.观察时用);四.灌注小室培养法 优点 1.连续观察活细胞的动态变化 2.研究理化性质对培养细胞的影响和作用 3.活细胞的反应.;不锈钢培养小室图 A 中央切面图 B侧面图(mm);灌注小室及灌注系统示意图 A.排液瓶 B.受液瓶 C.不锈钢灌注小室 D.扁锥型小孔道 E、F、J .2号注射针头 G、H.塑料导管 I玻璃导管 K、L.14号注射针头(塞以棉花);五.培养板培养方法 ;;培养过程：;六、转瓶培养;;;生物观测台;;;;;