PCR样品DNA或RNA的提取.pptxVIP

蜜蜂分子生物学通用技术-PCR检测应用实例;蜜蜂样本的采集、标记及保存;蜜蜂样本分布图;主要试剂;??制冰机、低温离心机（eppendorf centrifuge 5004R）、移液枪（Gilson，10μl、20 μl、100 μl、200 μl、1000 μl量程）、无菌枪头（10μl、20 μl、100 μl、200 μl、1000 μl）、漩涡混合器（Labnet VX100）、掌式离心机（ISC BioExpress）、电子天平（Mettler AE100）、超净工作台（PCR Chamber）;从-80℃冰箱中取出单个蜜蜂样本放入已标记的1.5ml离心管中，用一次性塑料研磨棒快速捣碎，在无菌工作台内加入500μl细胞裂解剂（TRIzol），漩涡震荡1min。室温孵育3min，充分降解样品中的核酸蛋白； 每个离心小管加入100μl氯仿后盖好盖子，上下剧烈震荡50次后置于室温下孵育3分钟； 放入低温离心机内，在4℃下10,000rpm离心10min。样本混合液分离为下层的红色的苯酚氯仿层和无色上清水溶液。样品总RNA被溶解在上清水溶液中；;将离心管内的上清水溶液移入另一个1.5ml离心管中，加入500μl乙丙醇，上下倒置混匀　后，室温静置10min后，4℃下12,000rpm离心15min。粉红色RNA析出物沉淀于离心管壁内侧； 倒掉离心管内溶液，加入70%乙醇500μl，