生药成分的定量分析方法.ppt

对照品与供试品溶液的制备 对照品溶液的制备 五味子酯甲对照品5.8mg →精密称定→置5m1量瓶中→甲醇溶解定容→1.16mg/ml的对照品储备液。 供试品溶液的制备 药材粉末（过三号筛）0.5g →精密称定→精密加入甲醇50ml →称定重量→超声处理30min →放冷→称定重量，补足失重→摇匀滤过→精密吸取续滤液25ml →浓缩至10ml并定容→ 微孔滤膜过滤→供试品溶液。 线性 对照品溶液，系列浓度进样同样体积//同一浓度改变进样体积 浓度范围至少作10倍 HPLC-UV: R＞0.999 HPLC-ELSD: R＞0.995 对照品稀释液 峰面积 RSD% 11 230.8 2.66 11 230.3 11 246.5 11 233.8 11 241.0 11 236.4 样品编号 峰面积 RSD% 9 2199.7 2.58 9 2167.3 9 2273.8 9 2262.6 9 2327.9 9 2276.9 仪器精密度 检测限与定量限 信噪比法 S/N 噪音测定：空白溶剂 检测限：进已知浓度的对照品，根据其对应的峰高值，将对照品溶液稀释至约3倍信噪比的浓度 定量限：将对照品溶液稀释至约10倍信噪比的浓度，重复进样5-6次，峰面积RSD＜2%(HPLC/GC), 3%(TLCS) 稳定性 样品编号 进样时间(h) 取样量(g) 峰面积 含量(%) RSD(%) 9 0 0.5036 2213.9 0.41 1.23 9 1 0.5036 2200.6 0.41 9 3 0.5036 2242.1 0.41 9 7 0.5036 2230.2 0.41 9 11 0.5036 2273.2 0.42 样品编号 进样时间(天) 取样量(g) 峰面积 含量(%) RSD(%) 9 1 0.5036 2242.1 0.41 2.79 9 2 0.5036 2325.3 0.43 9 3 0.5036 2383.2 0.44 9 4 0.5036 2234.9 0.41 9 5 0.5036 2251.5 0.42 日内稳定性：RSD值%为1.23% 日间稳定性：RSD值%为2.79% 重复性 重复性：同一批次6份样品，计算平均含量 取样量（g） 峰面积A 大黄素测得量（%） 0.1028 974.0 1.31 0.1016 976.2 1.33 0.0997 951.6 1.32 0.1003 957.7 1.32 0.0943 902.3 1.32 0.1050 1013.1 1.34 平均值 1.32 RSD（%） 0.64 虎杖饮片中大黄素HPLC含量测定的重复性考察 准确度：加样回收率 同一浓度6份样品（样品浓度减半，1:1加入对照品） 3个不同浓度9份样品（样品浓度减半，按80%、100%、120%的比例加入对照品） 95%-105%，RSD＜5% 样品编号 取样量(g) 峰面积 测得量(mg/g) 对照品加入量mg 对照品测得量mg 回收率(%) RSD(%) 平均回收率(%) 9 0.2532 2327.9 2.0326 0.96 0.9792 102.0 2.18 101.7 9 0.2527 2333.5 2.0374 0.96 0.9860 102.7 9 0.2542 2356.7 2.0570 0.96 0.9994 104.1 9 0.2496 2285.9 1.9971 0.96 0.9586 99.9 9 0.2493 2266.7 1.9809 0.96 0.9436 98.3 9 0.2499 2327.1 2.0320 0.96 0.9922 103.4 耐用性 HPLC 3根不同商品规格色谱柱 样品溶液稳定性考察 非必须项目：柱温（室温+40℃），pH值，流动相比例范围 TLC 薄层板：2种不同品牌 温度：低温（4-10℃）、室温 湿度：高湿（75%）、低湿（20%） 中间精密度与重现性 中间精密度：至少3人用同一设备或同一人用3台不同设备 重现性：考察两个实验室之间的相对偏差（起草单位+复核所）＜10% 有重现性考察的，可不做中间精密度 比色法方法学研究内容 测定波长 λmax 标准曲线 r≥0.999 供试品溶液制备方法 精密度试验 RSD≤3％ 重现性试验 稳定性试验 加样回收率 显色条件 显色剂种类 显色剂用量 显色温度 显色时间 稳定性 阴性干扰情况 吸收度比值＜5％ 供试品 0.2～0.8 阴性样品＜0.04 测定结果精密度要求 紫外-可见分光光度法: RSD＜2% 比色法: RSD＜3% TLCS: RSD＜5% HPLC-UV: RSD＜2%; HPLC-ELSD: RSD＜5% GC: RSD＜2% “ ”