5章植物细胞工程.pptVIP

第六节 植物细胞培养的反应器 植物细胞的特性 细胞体积大 抗剪切能力差 培养时间长 呼吸率低，对氧要求低 根据通气和搅拌类型，生物反应器分为： 摇瓶反应器 搅拌型生物反应器 环流生物反应器和鼓泡塔生物反应器 一 机械搅拌生物反应器 二 鼓泡塔生物反应器 三 气升式生物反应器 四 转鼓式生物反应器 五 固定化生物反应器 六 各种反应器性能比较 第七节 进展与展望 新技术和新方法: 诱导子 前体饲喂 两相培养 毛状根和冠瘿瘤组织培养 植物生物转化 一 诱导子的应用 1 诱导子（elicitor)的分类 （1） 定义：指抗病过程中诱导植物在防御过程中产生植物抗毒素和引起植物过敏反应的物质，包括生物诱导子（生孢子、酶类、细胞壁碎片、代谢物及培养基中的成分）和非生物诱导子（不是植物的天然成分，又能触发形成生物抗毒素信号的分子）。用来诱导次生代谢物。 （2）内源性诱导子 来自植物细胞的分子：细胞壁降解物、杂多糖、糖蛋白、木质素 （3） 外源性诱导子 病源微生物在侵入植物体内时自身的降解产物（如真菌诱导子）分为：多糖类，蛋白类，不饱和脂肪酸类。 2 诱导子的作用机制 （1） 膜脂过氧化和膜结构功能的改变 （2） 生成植保素（抗微生物） （3） 蛋白酶抑制剂的生成 （4） 合成和分泌降解微生物细胞壁的酶 3 诱导子在细胞培养中的应用 植物细胞培养中应用的诱导子： 糖蛋白类：糖基化的氧化牛血清的蛋白和氧化溶菌酶（尼克碱） 蛋白质类：果胶酶、链状蛋白酶 多糖类：镰刀霉菌丝体、乙烯、水杨酸、几丁质、脱乙酰几丁质、病原体的细胞溶解物 微生物类：真菌诱导子（微黄霉素，灰葡萄孢，大丽轮枝孢和融粘带酶混合培养液）（紫杉醇） 二 前体饲喂 1莽草酸（芳香化合物和多酚化合物） 2 氨基酸（生物碱和肽类抗生素） 3 乙酸（前列腺素和大环抗生素） 三 两相培养法 两相培养法是在培养细胞外创造一个次级代谢物的储存单元，方法是加入固相或疏水液相，形成两相组织培养，达到收集分泌物的目的 两相培养的条件：添加相无毒，易吸附易溶解。两相易分开，不吸附培养基 四 转基因技术在次级代谢生产中的应用 1 冠瘿瘤（根瘤农杆菌）组织和毛状根（发根农杆菌）培养技术 2 转基因植物和活性成分生产，如： 免疫球蛋白的植物表达 五 植物生物转化技术与生物制药 1 概念 （1）定义：生物转化或生物催化——生物离体培养细胞、器官及细胞器，利用体系中的酶对外源化合物进行转化（结构修饰），获得有价值的产物。 （2）生物转化的优点 离体生产，细胞无限生长，生长循环期短 （3） 可用于生物转化的化合物种类： 芳香族化合物、类固醇、生物碱、香豆素、萜类 （4）植物生物转化的意义 产生新化合物，改造已有化合物 2 植物细胞和器官培养物的生物转化 基因工程，细胞工程，酶工程等方法 生物转化的类型： （1）羟基化 （2）糖基化 （3）醇和酮的氧化还原反应 （4）水解反应 （5）环化反应 （6）碳-碳双链的还原反应 （7）羰基还原反应 （8）硝基还原反应 A 利用固定化细胞培养进行生物转化 将细胞固定在特定的固相载体上。优点 ：细胞抗剪切能力强，重复使用。有效转 化底物，细胞可再生、产品易处理等 固定化方法：离子交换、沉淀、聚合 、凝胶包埋 B 基因工程方法在生物转化中的应用 C 利用植物酶进行生物转化 木瓜蛋白酶 氧腈酶 环化酶 酚氧化酶 卤化过氧化酶 脂氧酶 细胞色素P450单氧化酶 第五章 植物细胞工程 上游工程：细胞培养、细胞的遗传操作和细胞的保藏。 下游工程：以植物细胞为基本单位，在离体 条件下进行培养、繁殖的过程。 包括：基因工程、染色体工程、染色体组工 程、细胞质工程、细胞融合工程。 第一节 基本概念 第二节 植物细胞工程发展简史 第三节 植物细胞的形态及生理特征 第四节 植细胞培养的基本技术 第五节 影响植物次级代谢物累积的因素 第六节 植细胞培养的生物反应器 第七节 进展与展望 第一节 基本概念 1 植物细胞的全能性（Totipotency） 2 植物组织和器官培养 3 植物的分化 胚胎发生（从精卵结合到种子） 器官发生（从种子到植物体） 4 植物的脱分化：已分化为组织器官的细胞 离体条件下变成未分化的细胞和组织的过程 5 植物的再分化：脱分化的愈伤组织再分化形成胚状体或愈伤组织直接分化为胚状体 6 植物无菌培养 植物培养 愈伤组织培养（由外植体脱分化） 悬浮培养 离体器官的培养 胚胎培养 7 细胞培养 得到单个细胞无性繁殖系 8 分生组织培