生物选修3基因工程的基本操作程序上课用.pptVIP

2008年诺贝尔化学奖授予了“发现和发展了水母绿色荧光蛋白“的三位科学家。将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是 A．追踪目的基因在细胞内的复制过程 B．追踪目的基因插入到染色体上的位置 C. 追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布 D．追踪目的基因编码的蛋白质的空间结构。 C 继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答： （1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是____________________。 （2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入__________中，原因______________________ （3）通常采用____________________技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。 （4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的__________细胞中特异表达。 显微注射技术 受精卵 受精卵（或早期胚胎细胞）具有全能性，可使外源基因在相应的组织细胞中表达。 DNA分子杂交 膀胱上皮 （或早期胚胎） * A就是腺嘌呤，T就是英文的three，P是指phosphate 即磷酸。 ATP，GTP，CTP，TTP 可以统称为 NTP d指的是deoxy 即脱氧。 dNTP的全称即 三磷酸脱氧核苷酸 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 2.将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中） （2）操作程序: 提纯含目的基因表达载体 取受精卵 显微注射 移植到子宫 受精卵发育 新性状动物 常用法：Ca2+处理 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 3.将目的基因导入微生物细胞 思考：为什么要用Ca2+处理受体细胞？ 用Ca2＋处理，增加细菌细胞壁的通透性 培养 培养 培养 导入 含目的基因的重组质粒导入大肠杆菌 含有氨苄青霉素 的完全培养基 含有四环素的完全培养基 两种培养基均不能生长大肠杆菌 Ca2+ 处理细胞形成感受态细胞 检测 （培养不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性基因的大肠杆菌） 只有氨苄青霉素抗性基因质粒 只具有氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌 不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性积基因的大肠杆菌 完全培养基 导入 接种培养 接种培养 接种培养 含有四环素的完全培养基 完全培养基 大肠杆菌不含抗四环素基因 证明： 不存活 含有四环素的完全培养基 证明： 大肠杆菌的受体细胞含有目的基因 四环素抗性基因 四环素抗性基因 存活 如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？ 存活 导入 接种培养 接种培养 接种培养 接种培养 含有四环素的完全培养基 完全培养基 大肠杆菌不含抗四环素基因 证明： 不存活 含有四环素的完全培养基 证明： 大肠杆菌含抗四环素基因 证明： 大肠杆菌的受体细胞含有目的基因 四环素抗性基因 四环素抗性基因 完全培养基 存活 如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？ 受体生物 植物 动物 微生物 受体细胞 导入方法 受精卵 体细胞 受精卵 细胞/个体 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注 射技术 用Ca2+处理成感受态细胞 采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的作法正确的是（　　）A.将毒素蛋白注射到受精卵中B.将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养C.将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵D.将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中 四、目的基因的检测与鉴定 检测: 是否插入目的基因 是否转录 是否翻译 鉴定: 分子水平鉴定 个体生物学水平鉴定 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ① 首先取出转基因生物的基因组DNA； （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: ② 将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针； ③ 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中。 （一）检测 基因探针：是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列。 　 基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。