福林酚测蛋白质课件.pptVIP

福林酚测蛋白质 (1);实验目的;实验原理;第二步——与福林-酚试剂反应 在碱性条件下 ，这种被作用的蛋白质上的酚类基团极不稳定，很容易还原福林酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸，生成钨蓝和钼蓝的混合物，呈蓝色。 可利用分光光度计测得650nm的OD值，浓度大小跟OD值成正比y=kx+b OD值是optical density（光密度）： 入射光强度与透射光强度之比值的常用对数值 ;分光光度计的原理;制作标准曲线： (1）选择标准蛋白溶液(牛血清白蛋白），配制一定浓度母液 配制标准溶液浓度梯度，测定对应的OD值 (3）根据浓度和OD值得回归方程即标准曲线 利用excele软件 如何制作？ 如何评估？; 实验方法;实验方法;分光光度计的使用方法;;微量移液器的使用;1：选择量程 根据转移液体的量，选择正确量程的微量移液器 2：调节吸量体积： 将微量移液器调至所需体积，千万不要将读数的调节超出最大值和最小值； ; 3：吸量 用移液器的吸杆插上合适的吸头，旋紧。 握紧微量移液器，用大拇指按至第一档，将吸头插入溶液中。 然后松开大拇指，慢慢释放按钮以吸取液体（否则液体进入吸嘴太快，导致液体倒吸入移液器内部）；然后将微量移液器移出液面。 释放液体时，枪头接触在容器壁上，先慢慢按至第一档，停留1～2秒后，再按至第二档以排出所有液体。;4. 更换吸头： 吸取不同的液体，一定要更换枪头，防止试剂交叉污染，更换枪头时，对着废弃桶，轻轻按下卸载吸头的弹射器，吸头自然脱落在废弃桶内。 5. 微量移液器的放置： 实验完毕后，将移液器调回到接近最大量程，使弹簧处于松弛状态，放到或者悬挂在架子上。 ;1. 吸取不同的液体时，切记要更换吸头， 2. 调节移液器时，动作要轻缓，千万不要将读数的调节超出最大值和最小值，否则会造成损坏。 3. 吸取液体时，动作要轻缓，防止液体随着气流进入移液器的上部； 4. 带有残余液体吸嘴的移液器不能平放。 5. 每次实验完毕后将微量移液器调至接近最大刻度，使弹簧处于自然伸展状态。 6. 必须定期让专业人员进行校正，不能火烧灭菌，不能摔。 ;常用的测定蛋白质含量的方法