光学分析法的基础.ppt

二、定量方法 （一）单组分定量 1. 标准曲线法 A c Ax cx 标准曲线 校准曲线、线性范围和测定限 校准曲线也称校正曲线，是表示被测物质浓度或量与测定仪器响应信号值之间的定量关系曲线，包括工作曲线和标准曲线。 校正曲线的绘制 线性回归，即用最小二乘法求回归方程 使用校正曲线时需注意： 至少5个点，一般5～10个点，并且应至少一个数量级范围。 纵坐标上的最小刻度应与响应值的实际有效数字相适应。 尽量使曲线的效率接近1。 每次测定样品时应同时绘制标准曲线。 线性范围 测定限 上限、下限 灵敏度和检出限 灵敏度（Sensitivity） 指该方法对单位浓度或量的被测物质的变化所引起的分析信号值的变化程度。常以标准曲线的效率衡量。 检出限 Limit of detection 指对某一特定方法，在给定的置信水平内，可以从试样中定性检出待测物质的最小浓度或量。对于不同的系统，计算方法不同，即使同一系统，方法不同，计算方法也不同。IUPAC规定： 对于光谱分析，可测量的最小分析信号xL为 空白试验多次测量的平均值 根据一定置信度确定的系数 空白试验多次测量的标准差 与 相对应的浓 度或量即为检出限L 方法的灵敏度 2. 标准比较法 该法是标准曲线法的简化，即只配制一个浓度为cs的标准溶液，并测量其吸光度，求出吸收系数k，然后由Ax=kcx求出cx 该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律，且cx与cs大致相当时，才可得到准确结果。 （二）多组分定量方法 由于吸光度具有加合性，因此可以在同一试样中测定多个组份。 设试样中有两组份 a 和 b，将其显色后，分别绘制吸收曲线，会出现如图所示的三种情况： 1. 解方程组 测定b组分时，选择b组分的最大吸收波长作测定波长?1，由b的峰顶向横坐标作垂线与a吸收曲线的一侧相交，从相交点作横坐标的平行线与a吸收曲线的另一侧相交，交点所对应的波长为参比波长?2 。在?1和?2处分别测量吸光度 与 ，然后相减求 。 在两波长处a组分的吸光度相等 ，b组分的吸光度差值 与b组分的浓度呈正比。测组分a时，可用相同的方法选择b组分具有等吸收的两个波长，消去b的干扰，测定a组分的浓度。 例如，入射光的强度为100，透射光的强度为35，则T = 0.35或35%。 溶液的透光率愈大，表示它对光的吸收程度愈小；相反，透光率愈小，对光的吸收程度愈大。 实践证明，溶液对光的吸收程度与溶液浓度、液层厚度及入射光波长等因素有关。如果保持入射光不变，则溶液对光的吸收程度只与溶液浓度和液层厚度有关，即 为了方便起见： 吸光度（absorbance） 吸光系数 液层厚度 溶液浓度 当a、c一定时，A∝b Lambert’s law 当a、b一定时，A∝c Beer’s law Lambert-Beer 定律可表述为：在一定条件下，物质的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比，称为光吸收定律，是吸收光谱定量的依据。 Lambert-Beer 定律是均匀、非散射介质对光吸收的基本定律，只有对入射光是单色光才完全适用。 2. 吸收系数 absorptivity a为吸收系数，是指在一定入射光波长下，单位浓度及单位液层厚度时的吸光度。即 一般b的单位为cm，a的单位与c的单位有关。 比吸光系数 specific absorptivity 比吸光系数是指一定波长时，溶液浓度为1%（w/V），厚度为1cm的吸光度，用 表示。 摩尔吸光系数 molar absorptivity 摩尔吸光系数是指一定波长时，溶液浓度c为1 mol/L，液层厚度b为1cm时的吸光度，用?表示。 ?和 不能直接测得，需用已知准确浓度的稀溶液测吸光度计算得到。 解： 例：称取1.00mg维生素B12(M=1355)，配成25.00 ml水溶液，吸收池厚度为0.5cm，在361nm波长下测得吸光度为0.414，计算摩尔吸光系数。 例：用纯氯霉素配制100ml含2.00 mg的溶液，在278nm，用1.00cm的吸收池，测得T=24.3%，求比吸光系数和摩尔吸光系数。 ?与物质的本性、溶剂和入射光的波长有关，即 （1）物质不同， ?不同，是物质的特性常数。 （2）溶剂不同，同一物质的?不同，所以应注明溶剂。 （3）?不同，同一物质的吸收系数也不同，所以吸收系数应注明波长； （4）入射光的纯度：单色光是经单色器色