高效液相色谱操作步骤1.pptxVIP

高效液相色谱; 1.概述-发展;色谱法于二十世纪五十年代之后飞速发展，并发展出一个独立的三级学科-色谱学。 1952年英国科学家阿切尔·马丁、理查德·辛格因发明了分配色谱法而共同获得诺贝尔化学奖，此外色谱分析方法还在12项获得诺贝尔化学奖的研究工作中起到关键作用。; 1.概述-色谱分离的特点;色谱分离的几个概念 所有的色谱分离操作均分为：装柱、上样、层析、洗脱。 其中的固定不动的相，称为固定相； 携带试样混合物流过此固定相的流体，称为流动相； 作为流动相的液体或气体，称为洗脱剂； 洗脱时从柱中流出的溶液，称为洗脱液； 加入洗脱剂使各组分分层的操作，叫层析，也叫展开。;分离原理;常用的固定相（色谱柱填料）;硅胶：应用广泛，适合各类成分 氧化铝：主要用于碱性或中性亲脂性成分，如生物碱、甾体、萜类等 活性炭:用于水溶性氨基酸、糖类及苷类 聚酰胺：主用于酚类、醌类如黄酮类、蒽醌类及鞣质等成分;;吸附色谱;;;离子交换树脂法;大孔吸附树脂;分配色谱;正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占60～70％。 ;高效液相色谱仪的应用;色谱柱简介;化学键合相;流动相;流动相的选择原则;色谱分离过程理论基础;柱效率 实际工作中，塔板数的计算用下列公式： 而理论塔板数的计算公式为： n = L / H 其中L为色谱柱的柱长； H为理论板高度。; 考虑到组分在死时间内不参与柱内分配，用调整保留时间代替保留时间，得有效塔板数和有效塔板高度：;保留时间（t R）：从进样到某个组分的色谱峰顶点之间的时间间隔 死时间（t M）：不被固定相滞留的组分从进样开始、通过色谱柱、到出现峰最大值所需要的时间。 调整保留时间（t R ＇）：t R＇= t R－t M;液相色谱图相关术语(1);HPLC的图形结果 --色谱图(Chromatogram);峰宽Wb：色谱峰拐点处的两条切线与基线的两个交点之间的距离； 半峰宽Y1/2：峰高一半处对应的峰宽，为2.35? ； 相邻色谱峰峰顶之间的距离除以此二色谱峰的平均宽度。用R表示：;;液相色谱图相关术语(2);;拖尾因子Tf;液相色谱图相关术语(3);噪声和漂移;流动相脱气的方法;HPLC用水;流动相溶剂的要求;洗脱方式;化学键合相;评价色谱柱好坏的标准;对理想检测器的要求;紫外检测器（UV）;荧光检测器（FD）;示差折光检测器（RID）;蒸发光散射检测器（ELSD）;检测器比较;HPLC定性、定量分析;常用的定量方法;外标法定量（一）;外标法定量（二）;内标法定量（一）;内标法定量（二）;内标法定量（三）;校正曲线的检测范围;液相色谱仪的基本结构;液相色谱的基本流程图;保护柱;一、流动相的配制;二、样品处理;三、色谱柱的连接;四、放置流动相;五、开机;六、系统排气;七、冲洗流路（进样前的系统准备）;八、设定分析方法;九、进样分析;十、数据处理;十一、工作完成后的必要维护