第一章基因工程的基础知识与基本技能1.pptVIP

第一章 基因工程的基础知识与基本技术;一、基因工程的基本知识 （一）基因的结构特点 结构基因 调节基因 启动子（promoter） 终止子（terminater） 增强子（enhancer） ;1、原核生物基因的结构特点 大多为结构基因，很小一部分为调节基因； 具有转录单元，形成多顺反子mRNA ;（1）操纵子（operator）结构 指原核生物DNA上，一系列在作用上密 切相关而排列在一起的结构基因和操纵基因的总 和，是原核生物的一个遗传单位。 ;（2）原核生物mRNA的特征 半衰期短 、 具多顺反子形式 存在SD序列：起始密码子AUG上游7-12个 核苷酸处有一保守序列，可与16srRNA 3’端反向互 补，此序列称为SD序列。 5-AGGAGGU-3 作用：核糖体-mRNA结合过程中起作用。;（3）原核生物基因的终止子特点 存在富含有GC碱基的二重对称区。 RNA易形成RNA-RNA发卡结构，破坏一 部分RNA-DNA杂交链。 存在一段由4-8个A组成的序列 3’端为寡聚U，则杂合链的易出现不稳定的rU·dA区域;终止子对转录的终止;2、真核生物基因的特点 （1）不连续性 ;（2）内含子 I型自我剪接内含子 II型自我剪接内含子 Ⅲ型内含子 真核rRNA 核mRNA、tRNA 核内前体mRNA 蛋白质内含子(intein)：是蛋白质中的一段多肽链, 它靠自我剪切的方式从前体蛋白中分离出来, 而两端的外显肽（extein）以肽键的方式相连。 翻译内含子（translational intron）：mRNA中存在与内含子对应的核苷酸序列，在翻译过程中这序列被“跳跃”过去，因此产生的多肽链不含有内含子对应的氨基酸序列。;（3）外显子 mRNA剪接方式不同，产生了mRNA多态性。 组成型剪接（constitutive splicing）： 选择性剪接（alternative splicing）：;（4）连接区（exon-intron junction sequence） 连接区序列高度保守，剪接过程重要的识别序列 GT-AG法则：多数内含子5’端起始的两个碱基都是GT，而3’端最后两个碱基总是AG，由于这两对碱基的高度 保守性和广泛性，则把它称为GT-AG 法则。 ;（5）重复序列 卫星DNA：染色体DNA经氯化铯密度梯度离心,其高度重复序列因组???不同而在主带旁自成一条或数条条带。 小卫星DNA（VNTR，串联重复序列可变数）：D短重复单位6-40bp，重复6-100次，常位于非编码区，分布广泛。 微卫星DNA（STR，简单串联重复）：重复单位长度通常为2-6个核苷酸单位，重复6-60次。 中度重复序列： Alu元件：属于非自主的逆转录转座子,人类基因组内的拷贝数可达140万个,占基因组的10%以上. ;（二）从DNA到蛋白质 1、中心法则与反中心法则; RNA的编辑： mRNA序列发生了 不同于模板DNA的变 化，使翻译生成的蛋白 质的氨基酸组成，不同 于基因序列中的编码信息。;2、基因表达（gene expression） 转录（transcription）: 翻译（translation）: 基因表达调 控（ gene regulation /gene control）:;;;1）原核生物的基因表达 a.原核生物启动子：;b.乳糖操纵子与调控系统;lac体系受调控的证据 lac体系的“开-关”特性 ;;;关于负控诱导的几点说明;代谢产物活化蛋白（CAP），又称为cAMP受体蛋白，能够与cAMP形成复合物；cAMP-CAP复合物可以结合到乳糖操纵子的启动基因上，可以促进转录的进行。 则：正调控因子为： cAMP-CAP复合物;CAP;关于正调控的几点说明;（2）真核生物的基因表达;类别II基因启动子的结构（共有）： 核心元件：包括转录起始位点（initiator，INR）和 TATA区。 转录起始子：转录起始（+1）邻近的序列 TATA区：-25— -35区，保守序列：TATAAA 作用：使DNA双链解开，并决定转录的起点位置; 上游调控区（TATA区上游的保守序列称 上游启动子元件 UPE或上游激活序列UAS ）