超高效液相色谱法测定番茄酱中4种苏丹红染料残留效果研究.docVIP

PAGE PAGE 1 超高效液相色谱法测定番茄酱中4种苏丹红染料残留效果研究 　　摘要建立了超高效液相色谱（UPLC）对番茄酱中4种苏丹红染料残留的分析方法。方法以乙腈∶丙酮（v/v）=9∶1为提取溶剂，提取液过中性氧化铝层析柱净化，外标法定量。结果表明，4种苏丹红染料在4min全部分离，添加0.02～0.08mg/kg浓度水平时，4种苏丹红染料加标回收率为83.1%～90.1%，相对标准偏差（RSD）为5.6%～7.2%。方法检出限（S/N=3）为6.3～10.3μg/kg，定量限（S/N=10）为18.6～30.4μg/kg。该方法简单快速，准确可靠，可用于番茄酱中4种苏丹红日常抽样快速检测。 　　关键词超高效液相色谱；番茄酱；苏丹红染料；检测 　　中图分类号O657.7+1文献标识码A文章编号1007-5739（2013）09-0279-02 　　苏丹红染料是非生物合成的亲脂性偶氮化合物，一般不溶于水，易溶于有机溶剂，常用于汽油、机油、鞋油和汽车蜡等工业产品的着色[1]。近年来苏丹红染料被部分违法商家添加到食品表面着色以改善感官度[2]。据世界卫生组织的国际癌症研究机构（IARC）1995年确定，苏丹红属第三类致癌物质，它能够使老鼠和兔子患癌症。如果长期大剂量摄入会增加人体致癌的危险性。欧盟国家已在1995年禁止其作为食用色素，我国在《食品添加剂使用卫生标准》中也禁止将苏丹红作为食品添加剂使用[3]。在全国范围对食品中苏丹红染料进行了大规模的检测，并将其纳入了相关产品的必检指标[2]。 　　番茄酱是西餐中的一种重要调味品，是增色、添酸、助鲜、郁香的调味佳品。被大量用于意大利粉中，也可蘸炸鸡、炸鱼和薯条。国内对辣椒酱中苏丹红染料的检测有较多报道[2-4]，但番茄酱较少。而国内已有文献报道检测苏丹红染料残留方法均为高效液相色谱法（HPLC）[1-2，4]，但是方法普遍存在样品分析时间长、检出限高等缺点。而UPLC由于采用了1.7μm的小粒子填充柱，柱效提高，有更好的分离效率，缩短了检测时间。超高效液相色谱快速检测苏丹红染料的方法具有简单、灵敏度高和稳定性好等特点，能够满足批量样品检测的工作要求。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料与仪器 　　1.1.1番茄酱样品。来自于市场上购买的若干份各种品牌的番茄酱。 　　1.1.2试剂。苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ对照品（购自Dr.EhrenstorferGmbH）。乙腈（德国Merck公司，色谱纯）；乙腈、丙酮、正己烷、无水硫酸钠（广州化学试剂厂，AR）；中性氧化铝（上海五四化学试剂有限公司，层析用）。 　　1.1.3仪器与设备。电子天平（Precisa公司）；旋涡混合器（上海精科实业有限公司XW-80A）；离心机（Sigma公司3-30k）；高速匀浆机（IKA公司T-18basic）；振荡器（IKA公司Ks501digital）；旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司RotavaporR-210）；氮吹仪（天津恒奥HGC-24A）；Waters超高效液相色谱仪（带紫外检测器）；规格为20mm×150mm的玻璃层析柱、铁架台。 　　1.2试验方法 　　1.2.1样品的提取。称取10g（精确到0.01g）番茄酱于100mL离心管中，加入20mL乙腈∶丙酮（v/v）=9∶1，匀浆，加入5g无水硫酸钠振荡，5000r/min离心5min，上清液移入鸡心瓶，残渣用15mL乙腈∶丙酮（v/v）=9∶1重复提取1次，5000r/min离心5min，合并上清液于鸡心瓶，旋转蒸发至近干。用5mL正己烷溶解残渣，备用。 　　1.2.2净化。向层析柱加入5cm高的中性氧化铝粉，用5mL正己烷预洗，不收集。备用液直接过柱，用10mL丙酮∶正己烷（v/v）=5∶95洗脱，收集。50℃氮吹至近干，用1mL流动相溶解定容，过0.22μm滤膜，上机。 　　1.2.3色谱条件。色谱柱：ACQUITYUPLCTMBEHC18柱（2.1mm×50.0mm，1.7μm）；流动相：乙腈∶水（v/v）=88∶12，等度洗脱；流速0.3mL/min；柱温30℃；进样量10μL；检测波长为510nm。 　　2结果与分析 　　2.1提取溶剂的选择 　　食品中苏丹红染料检测的相关报道中提取溶剂通常有乙腈和正己烷，这2种溶剂对苏丹红染料的溶解度相对较好。但正己烷提取所需的溶剂量相对较多，且对苏丹红有干扰峰，而用乙腈作为提取液时未见有干扰峰[3]。本方法通过对乙腈、正己烷、正己烷∶丙酮（v/v）=3∶1和乙腈∶丙酮（v/v）=9∶1等4种提取溶剂对比，回收率都在75%以上。但在乙腈中加入一定量的丙酮有助于更好地溶解提取，回收率可达到83%以上。综合考虑，选择乙腈∶丙酮（v/v）=9∶1为提取苏丹红染料的提取溶剂。 　　2.2净化条件的选择