18种入侵植物的抗烟草花叶病毒活性研究.docVIP

PAGE PAGE 1 18种入侵植物的抗烟草花叶病毒活性研究 　　摘要为了综合利用入侵植物，通过离体半叶枯斑法，对18种入侵植物提取物的抗烟草花叶病毒（TMV）活性进行了筛选，研究结果表明，垂序商陆、粉花月见草、三叶鬼针草、紫茎泽兰、飞机草、钻叶紫菀、苦苣菜、野茼蒿等9种入侵植物的提取物浓度为10mg/mL对TMV有不同程度的抑制活性，抑制率在59.15%～93.06%，这些具有抗病毒活性的入侵植物具有开发植物源农药的潜在价值。 　　关键词入侵植物；烟草花叶病毒（TMV）；抗TMV活性；半叶枯斑法 　　中图分类号S435.72文献标识码A文章编号1007-5739（2013）09-0122-02 　　烟草花叶病毒（Tobaccomosaicvirus，TMV）是发现最早，应用最广的模式病毒，属披盖病毒科（Togaviridae）烟草花叶病毒属（Tobamovirus）[1]。它寄主范围广，每年可造成1亿美元以上的经济损失[2]。TMV在我国烟草产区中已被列为主要发生病害[3]。然而，到目前为止尚没有理想的抗烟草花叶病毒药物。国内外在植物病毒病的防治药剂方面进行了大量的研究，发现从植物中筛选抗病毒物质是开发植物病毒抑制剂的重要途径之一[4-5]，研究表明植物中的病毒抑制剂具有作用方式独特[6-8]、环境兼容性好等特点，因此从植物中寻找抗TMV活性物质具有重要意义。 　　随着全球化的发展，外来入侵植物数量也日渐增多，特别是一些有毒或恶性杂草的入侵与蔓延，对当地生物多样性及经济建设造成了重大影响[9]。云南省是我国生物多样性最丰富的省区，也是我国外来入侵植物危害最严重的省区，具有129种外来入侵植物，其数量之多，严重威胁着云南的生物多性和生态安全[10]。然而其资源丰富，生长迅速，如能以这些入侵植物为材料开发其作为绿色农药的活性，将为其治理和综合利用奠定基础。 　　1材料与方法 　　1.1供试寄主与病毒 　　TMV枯斑寄主心叶烟（Nicotianaglutinosa），TMV系统侵染寄主普通烟K326（NicotianatabacumCV.K326），漂盘育苗，无虫温室中培育。挑选6～8片叶龄，大小相似的健康植株作为试验材料。 　　烟草花叶病毒（Tobaccomosaicvirus，TMV）普通株系U1，由云南省农业生物技术重点实验室提供。繁殖于普通烟K326上，采用Goodingetal[11]的方法提纯，并用紫外分光光度计法测定其浓度为16mg/mL。保存于-20℃冰箱中，临用时取出用0.01moL/LPB缓冲液稀释500倍备用。 　　1.2植物提取物的制备 　　供试的植物样品（表1），于2010—2011年采自云南昆明、曲靖等地，将植物材料风干粉碎，采用甲醇回流提取3次，合并提取液，采用旋转蒸发仪浓缩回收溶剂，得到的植物提取物备用。提取物用少量DMSO溶解后，用灭菌蒸馏水稀释至所需的浓度进行活性筛选（DMSO的浓度不超过5%）。用相同浓度的DMSO无菌水溶液作对照。 　　1.3提取物抗TMV活性测定 　　挑选健康合适的心叶烟，暗室放置一夜。每株烟挑选大小相似的3片叶，摩擦接种TMV6h后将叶片剪下，沿中脉将叶片剪成2个半叶，分别放入提取物的溶液中作为处理；另一个半叶放入相应浓度的DMSO水溶液中作为对照。将叶片放入培养皿中在28℃光照培养箱中培养。48h后，待枯斑症状明显，统计试验结果，计算抑制率，每个处理重复3次。计算公式如下： 　　抑制率（%）=（对照枯斑数-处理枯斑数）/对照枯斑数×100 　　2结果与分析 　　采用离体半叶枯斑法对18种入侵植物的甲醇回流提取物进行抗烟草花叶病毒活性筛选，试验结果见表2。在提取物浓度为10mg/mL时，垂序商陆表现出最好的抗TMV活性，抑制率可达93.06%，其次为柳叶菜科的粉花月见草，抑制率可达82.81%，测试的几种菊科植物均表现出较好的活性，抑制率均在50%以上；茄科的黄果茄和曼陀罗，旋花科的园叶牵牛和裂叶牵牛，以及落葵科的落葵薯，马鞭草科的马缨丹，也显示了一定的抗病毒活性，抑制率在26.25%～47.22%。说明以上入侵植物中可能含有抗TMV的活性物质，有必要进一步研究其抗病毒的活性成分。而空心莲子草、土荆介、牛膝菊、北美车前等4种植物的处理组叶片出现了不同程度的黄烂现象，极有可能是这些植物的提取物中含有对烟叶有毒的成分造成的，可通过进一步降低提取物浓度测定活性进行验证。 　　3结论与讨论 　　对18种入侵植物的提取物进行了抗TMV活性研究，结果表明，垂序商陆、粉花月见草、三叶鬼针草、紫茎泽兰、飞机草、苦苣菜、钻叶紫菀、野茼蒿等8种入侵植物的提取物有显著的抗病毒活性，抑制率在59.15%～93.06%。此外，黄果茄、曼陀罗、园叶牵牛、裂叶牵牛、落葵薯、马缨丹等6种植物，