孕产妇及所生儿童艾滋病检测-章三英.pptVIP

蛋白印迹实验（WB） ——广泛使用的确认实验 基本原理 ? HIV全病毒抗原经过聚丙烯酰胺凝胶电泳,将分子量 大小不等的HIV抗原蛋白带分离开来,然后再把这些 已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。 将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经 电泳分离过的HIV病毒抗原。 试剂盒包括 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1.硝酸纤维膜（试剂膜条） 2.阴性对照 3.强阳性对照 4.弱阳性对照 5.浓缩样品稀释缓冲液(10×) 6.浓缩洗膜缓冲液( 20×) 7.酶结合物 8.底物液 9.封闭粉 10.孵育板， 11.使用手册 12.镊子 18或36条 1管 1管 1管 1瓶 1瓶 1管 1瓶 10袋 2或4块板 1本 1支 原理 加样 洗 加酶结合物 (Ab-HRP) 洗 加底物 ? HIV-1 病毒裂解蛋白 ? HIV-2 多肽条带 ? 内对照 ? 可选快速或过夜检测方法 ?其可检测标本中针对HIV不同抗原的抗体，故被用做 确认试剂。 ?不同的研究机构有不同的判定标准 gp140/gp105、gp36， 也可为gp125/gp80、gp36 p56、p26、p16 p68、p53、p34 gp160/gp120 gp41 p55、p24、p17 （或p18） p66（或p65）、p51、 p31 env gag pol HIV-2抗体特异带 HIV-1抗体特异带 WB结果判定标准 无条带或只有P17 无条带 2 ENV+GAG+POL 1 ENV + p24/p31 WHO FDA（USA） 阴 性 阳 性 组 织 我国的判断标准 ? HIV-1抗体阳性 同时符合以下2条标准可判为HIV-1抗体阳性：①至少有2条env带（gp41和gp160/gp120） 出现，或至少1条env带和p24带同时出现；②符合试剂盒提供的阳性判定标准 ? HIV抗体不确定 出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性 ? HIV抗体阴性 无HIV抗体特异带出现 《全国艾滋病检测技术规范（ 2009 版）》 HIV抗体确认实验结果 a 强阳性对照（HIV-1和HIV-2） b弱阳性对照（HIV-1） c阴性对照 d典型的HIV-2血清阳性反应 a b c d gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p39 p31 P24 p17 血清对照 HIV-2特异带 试验中应注意的问题 ? 1.充分浸泡 ? 2.充分洗涤 ? 3.显色时间 ? 等等 HIV抗体确认实验流程图 结果汇报 ? 符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（＋）”； 符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性（＋）”， 并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。 ? 符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（－）”。如疑 似“窗口期”感染，建议进一步做HIV-1P24抗原检测和HIV核酸检 测，尽早明确诊断。 ? 符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”， 在备注中应注明“4周后复检”。 《全国艾滋病检测技术规范（ 2009 版）》 晚期病例 在我院一中年男性患者，高烧1月余，肺部感染，有鹅口疮， CD4绝对计数是6个/ul ，3代试剂筛查呈阳性，快速阳性，WB 带型为gp160，gp120，gp41。 抗机会性感染一个月后，抗体筛查阳性，快速阳性、 P24抗 原阳性， WB带型gp160，gp120，gp41，p24。 55 婴幼儿HIV感染核酸检测 中国婴儿早期诊断依据 ? 5.4 婴儿早期诊断 ? 5.4.1 适用范围 ? 未满18个月的HIV感染 产妇所生婴幼儿； ? 母亲HIV感染状态不详 ，出现HIV相关临床表 现，临床怀疑HIV感染 者。 58 HIV-1 滤纸片干血斑样品检测技术 （Dried Blood Spot， DBS） 60 临床应用 67 ? 婴儿，18个月儿童 ? 缺点：污染 87 影响病毒载量测定结果的因素 88 ?血浆和血清标本 ?测定病毒载量应该首选血浆标本 ?血清的检测结果大约是血浆的50%（ 30- 80% ） 89 ? 用EDTA 抗凝剂的采血管采集全血后分离血浆样 本,其HIV－1RNA 含量比ACD 和肝素抗凝管中相 应含量多10 %～15 %及20 %～25 %。 90 ? 如果必须用RT-PCR方法测量肝素处理的血浆，可以向标 本中加入肝素酶以分解肝素 ? 肝素处理的血浆中