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普遍性转导及其作图 普遍性转导:指通过噬菌体可以转移细菌染色体上的任何基因,如P22,P1;它是由于处于溶源状态的原噬菌体进入裂解周期后,噬菌体编码的核酸酶将细菌染色体降解成小片段,然后偶尔错误地(1%)把细菌染色体的片断组合到噬菌体的头部。当转导噬菌体将内容物注入受体细胞后,形成一个部分二倍体。然后导入的基因通过重组,整合到宿主菌的染色体上。 普遍性转导作图的原理 由于产生转导噬菌体(携带有细菌DNA的噬菌体)的比例是很少的,以及由于噬菌体所能携带的细菌DNA量是有限的,因而在单个噬菌体中包含某两个基因的机会就与它们之间的距离成比例关系,如果基因足够近,它们包含在同一转导噬菌体中成为含有两个基因的转导子的概率就大,这种转导子叫共转导子(cotransductant),因此如果两个或更多个基因的共转导就表明这些基因是紧密连锁的。 普遍性转导作图的实例 供体:thr+leu+azir 受体thr-leu-azis 先让P1噬菌体在供体菌株中生长,P1的后代再感染受体菌株,假如以亮氨酸作为选择标记,那么就可以将感染后的受体细胞接种到不含亮氨酸的选择培养基上对leu+进行选择,凡是leu+的细胞都可以在这种培养基上生长,然后再把这些被选择的受体细胞接种到其他选择培养基上,检查共转导的频率,这样一个实验的典型数据如下表: 选择标记 非选择标记 leu+ thr+ 50%=azir,2%=thr+ 3%=leu+,0%=azir P1噬菌体转导E.coli用于推断基因顺序的实验数据 以leu+为选择标记时,同时有50%的azir ,2% thr+被转导,这表明leu靠azi比较近,而离thr比较远,所以排列顺序可能是下列二者之一: (1)thr —— azi-leu 或(2)thr —— leu-azi 但以thr+为选择标记时,发现同时被转导到受体菌的有3%的leu+,而未检出azir,这表明thr比较靠近leu,所以正确的基因顺序应该是(2)。 特异性转导 特异性转导也称局限性转导(restricted transduction),它仅能转导细菌染色体的某些特定部分。如温和噬菌体λ仅整合到宿主染色体的特定附着位点attB处而形成原噬菌体,attB位点的一边是半乳糖操纵子gal基因,另一边是生物素合成基因bio,attB与位于λDNA上的attP位点同源,通过单交换使λDNA整合到宿主染色体上。当λDNA裂解时,在少数情况下分离是不精确的,将attB附近的基因gal+或bio+错误地环化出去,而将噬菌体本身的部分片段留在细菌染色体上。 Specialized transduction ? 2003 John Wiley and Sons Publishers 1946年第11届冷泉港会议上Hershey和Luria宣布发现噬菌体r、h突变,Delbruck和Hershey发表了噬菌体重组实验。 三人获1969年Nobel Prize 噬菌体突变影响生活周期,会产生不同的噬菌斑。可以通过观察噬菌斑的形态来鉴别噬菌体的基因型。 单个噬菌体的突变必须通过电镜才能鉴定。 噬菌体重组与作图: 噬菌体的遗传重组与作图 与真核生物的作图相比,具有下列特点: (1)噬菌体重组与减数分裂重组不同。减数分裂染色体的联会和交换是发生在细胞分裂的某个特定阶段;而在噬菌体中,遗传物质的交换是多次轮回进行的; (2)在减数分裂中,重组是一个相互的事件,但从单个细胞所获得的溶菌产物中,相互重组子的数目并不相等,因为并不是所有的噬菌体染色体都被包装在成熟的噬菌体颗粒中; (3)病毒是单倍体,因而由二点试验所得的4种噬菌斑或由三点试验所得的8种噬菌斑都可直接统计。 噬菌体的重组作图 有三种类型的突变体对噬菌体遗传作图非常有用,它们是:宿主范围突变型、噬菌斑形态突变型、温度敏感突变型。 宿主范围突变体能感染某些菌株而对其他菌株是不能感染的。 噬菌斑形态突变体的噬菌斑由野生型的小噬菌斑突变成快速溶菌的大噬菌斑。 温度敏感型是指在30℃下这种突变体能无限增殖,而在40℃下则表现为突变型。 (1)噬菌斑的形态: (2)宿主范围: h:噬菌体能在E.coli B和B/2品系上生长, h+:只能在E.coli B品系上生长, Hershey使用的两个表型特征: 在B和B/2混合菌苔上产生透明斑。 在B和B/2混合菌苔上产生半透明斑。 r: 快速溶菌,噬菌斑大,边缘清楚。 噬菌斑小,边缘模糊。 r+: 噬菌斑与基因型 B和B/2混合菌苔 噬菌体杂交: 1. 亲本噬菌体(T2)基因型: hr+:透明,小斑,边缘模糊。 h+r:半透明,大斑,边缘清楚。 2. 杂交过程——混合感染实验: 两个亲本噬菌体混合感染E.coli B菌株,子代噬菌体通过感染B和B/2菌株
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