高效液相色谱分析技术—应用陈桂良.pptVIP

三种利福霉素同系物在蒸发光散射检测器上的响应基本一致。可用于利福昔明工作对照品的首次标定。 最小检出量及未检出杂质含量的估计:蒸发光散射检测器测定的最低检测限以信噪比为3计，三种利福霉素同系物均为0.03μg,以供试品的进样量计算，大于0.04%的杂质均能检出。 利福喷丁工作对照品纯度的确定:在高浓度利福昔明精制品的色谱图中检出的杂质峰，按主成分自身对照法测定杂质的含量，结果为3.30%，相应的利福昔明纯度为96.70%（RSD为0.28%，n = 6）。 利福喷丁工作对照品纯度的合成不确定度计算 标准物质的不确定度来源有三部分组成：（1）通过测量数据的标准偏差、测量次数及所要求的置信概率按统计方法计算出；（2）通过对测量影响因素的分析，估算出其大小；（3）物质的均匀性及其在有效期内的变动性所引起的不确定度。在标定利福喷丁工作对照品时，其不确定度主要由前二点给出。 测量方法 利用HPLC-ELSD法归一化系数相同的特点，采用主成分自身比较法确定杂质的量为3.30%，得到本品的纯度为96.70%；干燥失重为5.14%，炽灼残渣为0.04%；结果其含量为： (1-0.0514-0.0004)×0.9670 =91.69%。 计算公式 P = (1-L1%-S1%)*P0 方差传播系数 1. Urel(C) =〔Urel2(C1) + Urel2(P0)〕1/2 2. U(C1) = 〔U2(L1) + U2(S1)〕1/2 计算分量 L1为经60℃真空干燥至恒重，结果为1.02%。 L1 %= (W0-W)/W0 使用万分之一天平的重复性为0.035mg,样品称量为0.2097g,则： u1 = 0.1/3 = 0.033 mg u2 = 0.035 mg U(L1)= [2(u12 + u22)] 1/2 = 0.068 mg Urel(L1)= 0.068/209.7 = 3.24×10-4 S1为炽灼残渣，结果为0.04%。同理，使用万分之一天平的重复性为0.035mg,样品称量为1.0022g。 S1 %= (W2-W0)/( W1-W0) U(S1)= [3(u12 + u22)] 1/2 = 0.083 mg Urel(S1)= 0.083/1002.2 =8.3×10-5 P0为纯度, 采用HPLC主成分自身比较法确定，结果为96.70%，SD = 0.28%，n = 6，其中包含了重复性试验。 U(P0) = （0.00282/5）1/2 = 1.3×10-3 Urel(P0) = 0.0013/0.9670 = 1.34×10-3 合成计算不确定度 U(C1) = 〔U2(L1) + U2(S1)〕1/2 = 0.107 mg Urel(C1) = 0.107/[(1-0.033-0.0004)×1000]= 1.11×10-4 Urel(C) =〔Urel2(C1) + Urel2(P0)〕1/2 = 1.34×10-3 U(C) = 1.34×10-3×96.70% =0.13% 相对标准不确定度一览表 编号 标准不确定度 相对标准不确定度 来源 符号 数值 符号 数值 1 干燥失重 U(L1) 0.068 mg Urel(L1) 3.24×10-4 2 炽灼残渣 U(S1) 0.083 mg Urel(S1) 8.3×10-5 3 HPLC-ELSD纯度 U(P0) 1.3×10-3 Urel(P0) 1.34×10-3 参考文献 药物分析杂志 色谱 J Chromatogr. A J Pharm Biom Anal 其他 取CsA对照品和各杂质对照品适量，用乙腈-水（1：1）溶解并稀释成含CsA0.25mg/ml，CsB、CsG、CsH和IsoCsA分别为0.04mg/ml，CsC和IcoCsH分别为0.02mg/ml的溶液 硫酸特布他林片的HPLC测定 色谱柱：Waters Nova-Pak C18(3.9×15O mm)；流动相：乙腈-0.005 mol／L樟脑磺酸溶液(20：80)．流速1.0 ml／min；检测波长220 nm。在上述色谱条件下，其色谱图见图1。1、2及1分解产物的峰之间的分离度均大于1．5。 HPLC法同时测定四环素可的松眼膏中四环素和醋酸可的松的含量 色谱条件采用依利特HYPERSIL BDS—Cl8(300mm×4.0 mm，5μ )为色谱柱，0.01 mol/mL十二烷基硫酸钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5):乙腈(60：40)为流动相，检测波长254 nm，流速0.8 mL/ml，柱温40℃，进样量20 μl 反相离子对HPLC法测定盐酸多巴酚丁胺