生物化学简明教程第四版蛋白质化学.ppt

* (3)多肽链的氨基酸组成分析 酸水解、碱水解 氨基酸自动分析义测定 * （4）N-端分析 ① 二硝基氟苯法（DNP法、DNFB法或FDNB法） * ② 丹磺酰氯法（DNS法） * ③ 苯异硫氰酸(酯)法（PITC法、Edman降解法 ） * ①肼解法 （5）C-端分析 * （2）C-端分析 ②硼氢化锂还原法 * ③羧肽酶法 ③羧肽酶A、羧肽酶B和羧肽酶C * （6）多肽链的部分水解 a.化学方法 溴化氰（CNBr）裂解法: 消化道内几种蛋白酶的专一性 （Phe.Tyr.Trp） （Arg.Lys） （脂肪族） 胰凝乳蛋白酶 胃蛋白酶 弹性蛋白酶 羧肽酶 胰蛋白酶 氨肽酶 羧肽酶 （Phe.Trp）?$ b.酶解方法 * c.找重叠肽从而推断整个肽链的氨基酸序列 通过末端分析得到： 用胰蛋白酶水解得到第一套肽段，测定出氨基酸顺序。 用胰凝乳蛋白酶水解得到第二套肽段，测定出氨基酸顺序。 + — — + 第一向 第二向 AB 一个含二硫键的肽断裂产生的肽段 对角线电泳图解 * * * 血红蛋白中血红素辅基的结构 * 血红蛋白是由两个α-亚基和两个β-亚基组成的四聚体（α2β2），有稳定的四级结构，与氧的亲和力很弱，但当氧与血红蛋白分子中一个亚基的血红素辅基的铁结合后。即引起该亚基构象的改变，一个亚基构象的改变又会引起其余亚基的构象相继发生改变，亚基间的次级键被破坏，结果整个分子从紧密的构象变成比较松散的构象，易于与氧结合，使血红蛋白与氧结合的速度大大加快。 Hb的输氧功能 Mb的储氧功能 （3）免疫球蛋白的结构 V区：VL、VH 可变区（V区）：氨基酸种类、排列顺序差异较大，构成抗体的多样性。 恒定区（C区） 氨基酸种类、排列顺序恒定 C区：CL、CH * 2.6 蛋白质的性质与分离、分析技术 2.6.1 蛋白质的性质 a. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定 （1）蛋白质的相对分子量 b.凝胶过滤法测定 * pH = pI 净电荷=0 pH pI 净电荷为正 pH pI 净电荷为负 Pr COOH NH3+ + H+ + OH- + H+ + OH- Pr COO- NH2 Pr COO- NH3+ 当蛋白质溶液在某一定pH值时，使某特定蛋白质分子上所带正负电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值即为该蛋白质的等电点 （isoelectric point，pI） (2)蛋白质的两性解离和等电点 * 蛋白质的酸性氨基酸和碱性氨基酸含量与等电点的关系: 等离子点是蛋白质在不含其它溶质的纯水中，蛋白质所带净电荷为零时的溶液的pH值。等离子点是一个常数。 * 两性解离的应用 1、等电点沉淀 2、离子交换层析 3、电泳 * (3)蛋白质的变性作用 1．变性的概念和理论 变性是指天然蛋白质分子受理化因素的作用，有序的空间结构被破坏，从而导致蛋白质性质的改变以及生物活性的丧失，但未引起肽键的断裂，这种现象称为蛋白质的变性作用。 理论：吴宪提出 肽链从紧密有序结构→松散无序的结构 * 2．变性的因素 物理因素: 加热、紫外线、X-射线、超声波等。 化学因素: 酸、碱、有机溶剂、蛋白变性剂（尿素、盐酸胍）、重金属盐等。 * 2．变性机制 物理因素：对蛋白质施加了较高的能量，使次级键发生断裂。 酸碱变性：使蛋白质分子内带大量同种电荷，盐键破坏。 有机溶剂变性：影响氢键、疏水键和盐键的稳定性。 重金属：与蛋白质的酸性基团生成不溶性的盐并破坏分子内的盐键和氢键。 变性剂：与多肽链竞争氢键而破坏蛋白质二级结构。 * 3．变性的可逆性 * 4．变性蛋白质的特性 （1）溶解度显著减小，不溶于水，在中性液中可沉淀和凝固，但溶于酸及碱液中。 （2）生物活性全部或部分丧失（如免疫性、酶活性、氧结合能力）。 （4）生化性质的改变（如变性蛋白质易被酶消化） （3）一些侧链基团暴露，可滴定基团增加。 * (4)蛋白质的胶体性质 什么是胶体？（颗粒直径1~100nm） 蛋白质的亲水胶体溶液是相当稳定的，一方面由于蛋白质表面的亲水基团会吸引它周围的水分子，使水分子定向排列在它的周围，形成“水化层”。另一方面由于蛋白质在非等电点时带有同种电荷，同种电荷相斥，也使蛋白质分子保持一定的距离而不会聚合。 * (5)蛋白质的沉淀作用 ①加中性盐沉淀蛋白质（中和电荷、脱水膜） ②加有机溶剂沉淀蛋白质（破坏水化层） ③加重金属盐沉淀蛋白质（中和负电荷） ④加某些酸类: