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- 2019-09-25 发布于广东
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* 专题5 课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段 ★广泛应用于遗传疾病的诊断,刑侦破案,DNA序列测定等 ★分子生物学研究中最强大的实验技术之一 ★其本质是在体外模拟胞内DNA分子复制的过程 美国科学家穆利斯(K.B.Mullis) 发明了PCR技术,1993年诺贝尔奖 基础知识 1.DNA分子结构特点 DNA分子是由 的(即一条链为3’-5’,另一条链为5’-3’)脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。 双螺旋 两条反向平行 (一)PCR(多聚酶链式反应)原理 2、DNA复制的基本条件 DNA复制为什么需要引物? DNA聚合酶特性 DNA聚合酶不能从头合成DNA,只能从DNA母链的3′端开始延伸DNA链,或者说DNA合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。因此,DNA复制需要引物。 3.PCR原理 ⑵在80-100°C的温度范围内,DNA的双螺旋结构将解体,双链分开,这个过程称为变性。 ⑶当温度缓慢降低后,两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。 ⑴PCR利用了DNA的热变性原理,通过控制温度来控制双链的解聚与结合。 ⑷ PCR仪实质上是一台能够自动调控温度的仪器。耐高温的Taq DNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题,促成了PCR技术的自动化 。 4.需要为PCR反应提供的物质 缓冲液、DNA模
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