血液系统疾病中LRP15基因甲基化状态的研究.ppt

血液系统疾病中LRP15基因甲基化状态的研究 前言 白血病是一种多基因异常所致的造血干细胞克隆性疾病，病死率较高，是目前血液科治疗的难点。 近年来研究发现，白血病与甲基化关系密切，在白血病发生、发展、治疗、预后中起着重要作用。 CpG结构中胞嘧啶的甲基化对多个真核 基因的表达有重大的影响。在正常细胞 内，甲基化主要发生在CG贫乏区。富含 CG的区域(CpG岛)，则保持着非甲基化 的状态，但是一些疾病的相关基因例 外。  要准确了解DNA甲基化与细胞恶性 转化的关系，必须了解特定序列的甲基化状况。 LRP15基因是我室2001年克隆的一条白血病相关基因，功能不清，其调控区CpG岛密集，可能受甲基化调控。 实验研究目的 探讨血液系统恶性肿瘤及良性疾病 中LRP15基因甲基化的状况 第一部分 白血病中LRP15基因甲状 态的研究 二实验方法、步骤 1 MS-PCR反应原理 三 统计方法 采用Stata 7.0统计分析，各组间率的检验 采用χ2检验，随访资料的分析采用生存 分析。以P0.05为差异有统计学意义。 MS-PCR产物测序序列 CAATACATAACACAACTAACATCTTCAAACACCACCACCAAACAAAAATACAACCCCAAACAACCATACAAAACACAACTTAACTCACATTACTACGGCGGCCGCTGCAGACCCTACTCCAAACACCATAACCTTACAAAAAAAACAAACAAAAACAAAAAAAAAACAAAACACCACTTACCCAAAAATACAATCAAC 正常供者和AL中LRP15甲基化状况 七 AL患者LRP15基因甲基化状况与其生存率的随访研究 对此73例AL患者进行随访，随访时间截止 2004-4-15，发现 非甲基化组平均生存时间 非甲基化组平均生存时间 P=0.2636 不同肿瘤中CpG岛的甲基化谱是不同的，特定肿瘤中的CpG岛甲基化表明该肿瘤细胞在去除该基因的表达后更适合生存，该基因的灭活可能是导致肿瘤发生发展的原因之一。LRP15基因在复发难治白血病中高度甲基化，提示LRP15基因可能在白血病的发生发展中起一定作用，证明该基因修饰水平的变化与白血病发生及复发相关，可能为一个抑癌基因。 第二部分 血液系统良性疾病中LRP15 基因甲状态的研究 材料与方法 一标本 结 论 LRP15基因甲基化与恶性肿瘤有关，与正常细胞的幼稚与否无关。 2 LRP15基因的甲基化与急性白血病的发生发展有关，可以监测患者病情变化。3 LRP15基因的甲基化不但与恶性肿瘤有关，与免疫系统疾病也有一定关系。 * （一）甲基化PCR 反应（MS-PCR） 测序所得的序列相当于LRP15的反义链，CA相当于TG，表明该段序列中CG中的C未甲基化 52 71.23% 0 0% 阳性例数 阳性率 73 9 总例数 AL NPBSC 表1 P=0.000 图1.4.1 图1.5.2 图1.6.1 201天 165天 甲基化组、非甲基化组生存曲线 时间（d） 0 100 200 300 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 非甲基化 甲基化 1 1 8 2 2 1 1 4 2 5 6 2 2 3 5 1 1 生存率 9例MS-PCR所用血液系统良性疾病患者骨髓、1例COBRA所用ITP患者骨髓来自2003.6～2004.4解放军总医院血液科门诊病人 COBRA PCR产物5个阳性克隆菌落测序结果 TTTGTTTGTTTTTTTTGTAAGGTTATGGTGTTTGGAGTAGGGTTTGTAGCGGTCGTCGTAGTAATGAGTTAAGTTGTGTTTTGTATGGTTGTTTGGGGTTGTATTTCTGTTTGGTGGTGGTGTTTGAAGATGTTAGTTGTGTTATGTATTGTTTGTGTTTTGTGTTTTAGTTGTTGTGTATTAATGTTGTTGTTTTTGTTGGGAGTTAAGTTTGTTGGGTTGGTTTGGTTTTAGGTGGGTAGTTTGGTTTGTAG 此段序列CpG岛没有甲基化