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一、信使RNA的结构与功能 (重点) mRNA:是不稳定的RNA,含量最小,占细胞内RNA的2.5%,是合成蛋白质的模板。 mRNA的前体为HnRNA。 结构: 5ˊ末端:帽子结构m7 Gppp Nmp 促进核蛋白体与mRNA 的结合,加速翻译起始速度;增强mRNA 的稳定性。 3ˊ末端:polyA 与mRNA从核内向胞质的转运有关,增强mRNA的稳定性。 【三联体密码】triplet code:(重点) mRNA分子上每三个核苷酸为一组,可决定肽链上一个AA,称为三联体密码。 2、tRNA: 占10—15%, 是细胞内分子最小的一类核酸,约70-90个核苷酸组成。在pr合成中起运输AA的作用,称运输工具。 (1)? RNA含10-20%的稀有碱基 (2)单链,并形成局部的stem-loop结构。 二级结构为三叶草形:AA臂,DHU,反密码环,额外环, TΨ环 反嘧码环:反嘧码子 3’端: CCA—OH 三级结构:在二级结构基础上进一步折叠而成。倒“L”型 rRNA 含量最多70—80%,rRNA与核蛋 白的组成为核糖体,是pr合成的场所。 4.核酶ribozyme 【核酶】 具有催化作用的RNA称为Ribozyme,主要参与rRNA的自我剪接过程。 1995年有关于DNA有催化活性的报道。 第五节 核酸的理化性质及其应用 一、?? 核酸的一般理化性质 DNA是双链,线性高分子。溶液粘度大。 RNA是单链结构,分子量小,溶液粘度小。 它们均具有260nm紫外吸收峰。 二、DNA变性(重点) 1、【定义】:指双螺旋DNA在某些因素作用下,H键破坏,成为两股单链DNA的现象。 ? 变性因素:加热,极端PH,一定浓度的极性有机溶剂,尿素等。 本质:变性指H键断裂,不涉及核苷酸之间的共价键断裂。 DNA变性 2、DNA热变性与增色效应 变性后的核酸因碱基暴露,对260nm波长的光吸收增强,称为【增色效应】。(重点) 当核苷酸摩尔数相同时 A260 :单核苷酸>单链DNA>双链DNA,这种关系叫【减色效应】。(重点) 加热(80—100OC几分钟)使DNA变性,称热变性。 【解链温度】(Tm):通常把50 %DNA变性时的温度称为解链温度(融解温度)。(重点) DNA变性,紫外吸收增高;当紫外吸收值达到最大值的50%时的温度叫Tm. DNA含G,C多则Tm值高,反之则低。 二、【DNA复性】(重点) 定义 DNA变性后,在去除变性因素后如条件适宜,DNA恢复双螺旋结构。 DNA热变性后,在适宜条件下的复性过程叫退火。 三、分子杂交原理 【分子杂交】:异源单链DNA或DNA与RNA之间经退火形成的杂代双链。(重点) 原位杂交 Southern 杂交 Northern 杂交 Western 杂交 第六节 核酸酶 核酸酶nuclease指所有可以水解核酸的酶。 分类:DNase RNase 外切酶 内切酶 限制性内切酶: 具有严格的序列依赖性,具有极高的专一性,识别双链DNA 上的特定位点,将两条链都切断,形成平末端或粘末端。(重点) 第三章 核酸的结构与功能 1.核酸的化学组成 2.核酸的一级结构 3.DNA的空间结构与功能(重点) 4.RNA的空间结构与功能 5.核酸的理化性质及其应用 ? 分类 DNA 脱氧核糖核酸 RNA 核糖核酸 分布 细胞核 98% 10% 胞质 2%(线粒体) 90% ? 第一节????核苷酸的化学组成 核酸→核苷酸 磷酸 核苷 碱基(嘌呤、嘧啶) 戊糖(脱氧核糖、核糖) (一)??? 戊糖 DNA 含 β—D—2脱氧核糖 RNA 含 β—D—核糖 (二)??? 磷酸 使核酸、核苷酸呈酸性。 DNA 含 P 9.9 % RNA 含 P 9.4 % (一)??? 碱基: 腺嘌呤(A),鸟嘌呤(G); 胞嘧啶(C),尿嘧啶(U), 胸腺嘧啶(T), 嘌呤和嘧啶在260nm左右有紫外吸收。 (四)核苷 碱基与戊糖缩合而成 碱基 核苷 (五)??? 核苷酸:核苷的磷酸酯 体内游离存在的主要是5’-核苷酸。 多
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