基因载体选择和构建质粒.pptVIP

具有较小的分子量和较高的拷贝数：可容纳外源DNA更长； 改造内切酶位点，具有若干限制酶切单一位点的多克隆位点（人工合成且密集排列）； 具有2种以上的选择标记基因； 无mob基因； 插入外源基因后，较易导入宿主菌内复制和表达，且不会因接触而转移到另一个细菌。 二、质粒载体的必备条件 多克隆位点 ori 复制起始点 遗传标记 Amp polylinker 克隆载体 作为载体的质粒都含有三种共同的组分： 复制子、选择性记号、克隆位点 多克隆位点：是指载体上人工合成的含有紧密排列的限制性内切酶酶切位点的DNA片段。 1、 天然质粒； 2、 pBR322质粒载体； 3、 pUC质粒载体； 4、 pGEM系列质粒； 5. 穿梭质粒； 三、常用的质粒载体 1.天然质粒 概念：没有经过以基因克隆为目标的体外修饰改造的质粒。 在大肠杆菌中，常见的可用于基因克隆的天然质粒有Col E1、RSF2124和pSC101等，但存在一定的局限性。 第一个用于基因克隆的天然质粒pSC101，它只含有一个EcoRⅠ酶切位点，一个四环素抗性选择记号（Tetr ）,插入外源片断后不影响其复制功能。 但该质粒分子量较大，拷贝数低只具有抗菌