核酸分子杂交技术应用和核酸序列测定.pptVIP

三、DNA自动测序 采用荧光替代放射性核素标记是实现DNA序列分析自动化的基础。用不同荧光分子标记四种双脱氧核苷酸，然后进行Sanger测序反应，反应产物经电泳（平板电泳或毛细管电泳）分离后，通过四种激光激发不同大小DNA片段上的荧光分子使之发射出四种不同波长荧光，检测器采集荧光信号，并依此确定DNA碱基的排列顺序。 DNA序列分析仪： 四色荧光基团标记的dNTP DNA自动测序结果举例 探针的纯化 1.乙醇沉淀法 用无水乙醇沉淀2-3次 2.SG-50柱层析法 3.微柱离心法 第三节 核酸分子杂交的基本方法 核酸分子杂交根据被分析样品的性质不同，分为：液相杂交和固相杂交。 固相杂交： 液相中的核酸探针与位于固相支持物上的待测核酸片段进行杂交的过程。 分为： 原位杂交 印迹杂交 印迹杂交 将通过凝胶电泳分离的核酸片段转移到特定的固相支持物上,在转移过程中，核酸片段保持其原来的相对位置不变，然后采用标记的核酸探针与结合于固相支持物上核酸片段进行杂交的技术。 印迹杂交类别： （一）DNA印迹技术 (Southern blotting) （二）RNA印迹技术 (Northern blotting) （三）蛋白质的印迹分析 (Western