2-1-2微生物的实验室培养(2).pptVIP

【目标导航】　1.学会培养基的制备方法。2.掌握大肠杆菌的纯化方法。 一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1．用文字和箭头写出制备流程： 。 2．溶化环节中先加入 ，取出称量纸后再加入蛋白胨和 ，再加入琼脂，最后补加蒸馏水。 3．对牛肉膏蛋白胨进行灭菌的方法是 。 4．倒平板是制备牛肉膏蛋白胨的重要环节，下图为倒平板的操作示意图。 (1)请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程： 。 (2)甲、乙、丙中的灭菌方法是 。 (3)丁中的操作需要等待 才能进行。 二、纯化大肠杆菌 1．接种微生物的方法最常用的有 和 。 2．下图中甲为平板划线法中最重要的环节，乙为操作的结果。每一次划线后要将接种环 ，除第一次划线外，每一次划线的起点是 ，最后一次划线不要和 相连。 3．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的 ，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到 的表面进行培养。只要 ，就能在培养基表面形成单个的菌落。 判断正误： (1)在制备牛肉膏蛋白胨培养基的过程中，所用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法 (　　) (2)将培养基从干热灭菌箱内取出立即就可以倒平板 (　　) (3)平板划线法和稀释涂布平板法都要在固体培养基上操作 (　　) 答案　(1)×　(2)×　(3)√ 一、培养基的制备 1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤如下： 计算：依据牛肉膏蛋白胨培养基配方比例计算配制100 mL 的培养基时，各种成分的用量 ↓ 称量：牛肉膏比较黏稠，可用称量纸称取，牛肉膏和蛋白 胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖 ↓ 2．注意事项 ①天平称量时，注意放等大的称量纸，防止牛肉膏粘在托盘上。 ②在溶化时要用玻璃棒不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 ③培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，原因是琼脂在44 ℃以下凝固。 ④培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。 ⑤整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。 ⑥平板冷凝后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。 ⑦若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，易滋生杂菌，这个平板应丢弃。 1．请简述制备牛肉膏蛋白胨培养基过程中的几次灭菌。 答案　(1)对培养皿进行干热灭菌；(2)对制备成的培养基进行高压蒸汽灭菌；(3)倒平板过程中的灼烧灭菌(酒精灯火焰进行操作)。 2．等平板冷却凝固后要将平板倒置，请简述倒置的原因。 答案　因为平板冷却后，皿盖上会有凝结的水滴，且培养基表面的湿度较高，平板倒置后，既可以使培养基表面的水分更好的挥发，又可以防止皿盖上的水滴滴入培养基造成污染。 1．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是 (　　) ①待培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板　②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞　③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰　④用左手的拇指和食指完全打开皿盖　⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖　⑥等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上 A．①③④⑤ B．④⑤⑥ C．③⑤ D．①②④⑥ 【问题导析】 (1)培养基灭菌后，需冷却至 左右时才能倒平板，原因是琼脂在44 ℃以下凝固。 (2)倒平板的过程要在 附近进行。 解析　琼脂是一种多糖，在98 ℃以上可溶解于水，在44 ℃以下凝固，倒平板时高于50 ℃则会烫手，低于50 ℃时若不能及时操作，琼脂会凝固。无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。 答案　C 【一题多变】 倒平板的过程需要进行无菌操作，在培养基的制备过程中，还有哪些环节需要进行无菌操作？ 答案　要对培养基进行高压蒸汽灭菌，对培养皿进行干热灭菌 二、微生物分离与纯化技术 1．原理 微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的