第三章基因文库的构建.pptVIP

⑤ 在 T7DNA polymerase 和 ligase 作用下，以带 U 的单链 DNA 为模板合成一条新链，形成杂合双链（新生链中无U碱基）。 ⑥ 感染 dut+ ung+ E.coli　MV1190 后，在细胞分裂过程中，只有新合成的 DNA 链才能起模板作用合成新的并引入了诱变位点的子代双链 DNA 。而有 U 的 DNA 链，在 dut+ 和 ung+ 产物的作用下，尿嘧啶被水解，从而失去作为模板的能力。（突变的新生DNA链与模板链分开） * 第四节 实例3:基因编码序列的丙氨酸扫描诱变 一、研究目的 对Foy蛋白60个氨基酸的小区域进行突变，获得功能信息 对基因中10个带点氨基酸位点进行突变 二、可供利用的资源（略） * * Pvu I PX 和AS1引物 Pvu I Xma III AS1 Xma III Xma III AS1 体外合成 Pvu I Pvu I AS1 + Pvu I处理 AS1 Xma III Xma III AS1 图解说明详见书P64 * * * * * * * * * 第三章 基因文库的构建 主要内容 第一节 DNA基因文库 第二节 亚克隆 第三节 克隆DNA序列的体外诱变 第四节 基因编码序列的丙氨酸扫描诱变 * DNA片段 的获得 载体构建 细菌转化 重组体 的鉴定 限制性内 切酶消化 机械切割 双链cDNA 的合成 化学法 直接