第二章基因工程的主要技术原理1.pptVIP

第二章 基因工程的主要技术原理 一、质粒DNA的提取 1 .碱裂解法提取质粒DNA （2） 所用的试剂作用 ④ KAc-HAc缓冲液 （3）碱抽提法提取质粒DNA的步骤 第二步：破膜，蛋白质和DNA变性 ②引物的长度 ④引物的碱基序列 ⑤引物的碱基组成 3）避免形成引物二聚体（dimer） ⑥引物的Tm值 2、Northern blot 使引物的外侧序列 “转变” 成内侧序列。 （7）TAIL-PCR (Thermal Asymmetric Interlaced PCR ) template template 5’ 3’ 3’ 5’ P1 P2 P3 AD P1, P2, P3为特异性引物，25bp, Tm 65℃ 左右 AD为简并引物， 15-16bp, Tm 44-45℃ 已知序列 Liu, YG and Whittier RF (1995). Genomics 25:674-681. 1、Southern blot 双链DNA 限制性内切酶 消化 电泳分离 检测 放射自显影 转膜 NaOH变性 洗膜 杂交 标记的探针 NaOH或高温变性 原理和方法: 五 .分子杂交 技术 应用: 基因拷贝数检测; 基因文库筛选, 获取目的基因; 遗传疾病诊断; 转基因样品检测, 等… 是相对于Southern blot而命名的。 利用DNA-RNA链或RNA-RNA