111基因工程的原理.pptVIP

二、基因工程的操作程序 目的基因的获得 重组载体的构建 重组载体的转化和筛选 目的基因的表达和鉴定 获取目的基因的方法 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离法 ——鸟枪法 　用限制酶将完整的DNA随机切成许多片段，然后用某种检测方法挑选出所需要的基因。如用“核酸探针法”，核酸探针是用放射性同位素标记的DNA单链，具有非常特异的脱氧核苷酸序列，能与DNA互补链结合。　　 ⑵人工合成法——反转录法和化学合成法 反转录法 ： mRNA→单链DNA→双链DNA（目的基因） 化学合成法： 氨基酸序列→基因序列→合成目的基因 返回 运载工具——载体(质粒) 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在DNA连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 提取质粒并用限制酶切割 用连接酶将目的基因和质粒连接 重组载体的构建 目的基因与质粒的连接 返回 重组载体的转化和筛选 转化方法： 基因枪法、显微注射法和花粉管通道法。 受体是动物细胞时最常用的是显微注射法，是植物细胞时常用基因枪法。 筛选： 利用载体上的标记基因，借助选择培养基进行筛选。 将目的基因导入受体细胞 有表达产物(导入） 无表达产物（未导入） 选择培养基（