高通量测序技术在遗传性疾病实验诊断中的应用.pdfVIP

《中国产前诊断杂志(电子版)》201 ·专家笔谈·11 6年第8卷第4期 高通量测序技术在遗传性疾病实验诊断中的应用 吴丹 黄欢孙丽洲” (南京医科大学第一附属医院产科，江苏南京 210029) 【摘要】高通量测序技术(high—throughputsequencing)又称“下一代”测序技术，具有高准确性、高灵敏 性以及高性价比的绝对优势，对于传统医学和疾病研究而言是一次革命性的改变，对遗传性疾病的诊断 和筛查起着非常关键的作用。本文介绍了高通量测序技术的作用原理，回顾新一代测序在遗传性疾病 临床分子诊断实验室中的应用。随着高通量测序技术的继续发展和个性化医疗的不断普及，不但会给 生命科学研究带来更多的资源和便利，而且将对改善人类健康及生活质量起到巨大的作用。 【关键词】高通量测序技术；遗传性疾病；实验分子诊断 【中图分类号】 R714．53 【文献标识码】 A (true molecular DNA测序(DNAsequencing)即指测定组成single sequencing)技术平台、美国 DNA分子的核苷酸A、T、C、G的排列顺序。 Pacific molecule DNA测序作为一种重要的实验技术，极大地推 real—time)技术平台、美国Life Torrent公司、英 动了分子生物学的发展，是分子生物学中最常用的 基于FRET测序技术和美国Ion 国Oxford 研究技术之一。以Sanger法为代表的第一代测序 技术帮助人们完成了从噬菌体基因组到人类基因组 分子技术心]。本文主要对高通量测序技术作简要介 图谱等大量测序工作，但由于其存在成本高、速度 绍，并且回顾新一代高通量测序技术在遗传性疾病 慢、通量低等不足，并不是后基因组时代最理想的测 临床分子诊断实验室中的应用情况。 序方法。因此，为了满足研究的需要，第二代测序技 1高通量测序技术简介 术出现了，目前化较成熟的高通量测序技术主要包 高通量测序技术是一次性对几百万到十亿条 括罗氏公司的454测序技术、Illumina公司的Sol— DNA分子进行并行测序，又称为下一代测序技术，其 exa测序技术以及ABI公司的SOl。iD测序技术3 个主要测序平台[1]。但第二代测序技术仍有缺点， 可对一个物种的转录组和基因组进行深入、细致、全 如读长较短，给后续的序列拼接、组装以及注释等生 貌地分析，所以又被称为深度测序。该技术大都采用 物信息学分析带来困难，该技术原理建立在PCR的 了大规模矩阵结构的微阵列分析技术一阵列上的 基础上，DNA分子片段的数目比例在扩增前后有 DNA样本可以被并行分析，测序主要利用DNA聚合 相对偏差，在一定程度上影响了基因表达分析，尤其 酶或DNA连接酶和引物对模板链进行一系列的延 是对大量表达的基因。这些缺点相对制约了第二代 伸，并且通过精细设备观察并记录连续测序过程中的 测序技术的应用和发展，因此第三代单分子测序技 光学信号。它的特点包括：①通过有序活化或者无序 术应运而生。因第三代测序技术采用单分子读取技 的阵列可以实现大规模的并行化，以提供高程度的信 术，有着更快的数据读取速度，同时不需要PCR扩 息密度；②不采用电泳，设备易于微型化，大大降低了 增步骤，进一步降低了测序成本。现有的第三代测 样本和试剂的消耗量口]。高通量测序技术不仅可以 用于全基因组测序、转录组和基因表达调控研究、