5第五章基因的克隆与分离.pptVIP

预先设计合成的片断之间都有互补区域，不同片断之间的互补区域能形成有断点的完整双链。 二、基因组文库的构建与基因分离 　　基因组文库：将某一生物基因组DNA片段化并全部克隆后所获得的重组子群体的总称。理论上讲，这些重组载体上带有了该生物体的全部基因。 （一）基因组文库（genomic library） （二）基因组文库应满足的条件 1、文库的完整性 2、基因组信息的可重建性 3、文库的大小 （三）基因组文库构建的一般步骤 1、染色体DNA的分离 2、大片段的制备 3、载体的制备 4、重组连接 5、包装 6、重组噬菌体感染大肠杆菌 基因组文库 （四）基因组文库的筛选 筛选：从众多的分子克隆群体中将确定的克隆筛选出来 探针筛选法：两步或三步原位杂交法 （一）cDNA library 　将某一生物的特定组织或特定发育时期细胞内的全部mRNA反转录成cDNA，与适当的载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，这些cDNA克隆（包含着细胞全部mRNA信息）的集合称为该组织细胞的cDNA文库。 三、cDNA文库的构建与筛选 （二）cDNA文库应满足的条件 　　1、文库的代表性 　　2、序列的完整性 （三） 构建cDNA文库的一般步骤 （1）总RNA（total RNA）提取 （2）mRNA的分离纯化 （3）cDNA的合成 （4）cDNA与载体连接 （5）重组载体转化受体菌 ①