烟草中常见农药残留快速检测技术培训.pptx

烟草中常见农药残留快速检测技术培训;提 纲;01;;1.1 勤邦荣誉、资质;;;;产品认证;1.2 勤邦团队;;;打破进口试剂在国内垄断的第一先驱 在4000多个食品龙头企业检测实验室应用 为200多家食品加工企业规划建设实验室 在上海、广州、武汉、大连等城市建立23个办事处 市场遍及中国、欧盟、美国、东南亚等;14;二、项目背景;二、项目背景;竞争抑制免疫层析样本中的农药小分子物质在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线（T线）上的待检农药—BSA偶联物的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。; ;;金标试纸条的检测操作步骤;;样本剪碎放入提取液中;;; 将试纸条与胶体金读数仪联用： 实现检测结果数据化、可保存、可追溯； 实现高存储、快速、现场检测； 实时在线监控、分析和预警溯源； ; ;试纸条操作注意事项;8.操作前请仔细阅读说明书，不清楚以及模糊的地方要尽快与我们沟通。 9.检测前先准备好样本，样本回到室温，开始打开检测卡 10.卡打开应该在1小时内作出样本检测。 11.检测时在卡上做好样本编号标记。 12.不同的烟叶样本分开装袋，避免交叉污染。 13.每处理完一个样本剪刀都要进行清理，防止产生交叉污染。 ;固相载体 ;标准品浓度关系;微孔板;;酶; 加入标准品/样本和抗体;孵育;洗板过程示意图;加入酶标二抗;孵育;加入底物和显色剂;显色;终止;后加;;;1.抗原: 凡是能刺激机体产生免疫应答并能与应答产物特异结合的物质 2.抗体:可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白 3.稳定性:通常用户指的稳定性既指试剂盒的保存期，又指试剂盒不同批次的均一性 4.特异性:试剂盒特异性一般指试剂盒出现假阳性或假阴性的概率 5.准确度:一般用回收率来表示,是评价试剂盒好外的重要指标 6.准确度:指测定值(平均值)与真实值的接近程度,表示分析结果的正确性.由于无法知道榈的真实浓度,故通常采用添加回收率来表示: 回收率=(测定值-空白值)/添加量 7.精密度:指用某种方法重复测定同一均质样品所得测定值的彼此接近程度,表示分析结果的重复性. ;8.检测限:检测限指分析方法能够从样品的背景信号中检测出待测物存在时所需的最低浓度. 9.定量限:指分析方法能够对样品中的待测物进行定量测定的最低浓度. 10.交叉反应 因为共同抗原的存在，由甲乙两种细胞刺激机体产生的抗体不仅可分别与其自身表面的相应抗原表位结合，而且由甲菌刺激机体产生的抗体还能与乙菌表面的相同表位结合；同样，乙菌刺激机体产生的抗体亦可与甲菌表面的相同表位结合，但反应程度较弱，这种抗原、抗体反应即称为交叉反应（cross reaction） 交叉反应现象的形成可能与下列因素有关： （1）共同抗原，不同生物体的某些生物大分子具有相同的抗原结构； （2）共同表位，不同的生物大分子的某些片段（肽段）具有相同的表位； （3）相似表位，不同的生物大分子，其表位的部分空间构象十分类似，可以和同一种抗体的互补决定区相契合。 ;实验涉及到的仪器; 为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），温箱，洗板机和酶标仪。◎移液器：ELISA加样量小（20-200ｕl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：低、中、高三个刻度分别吸取指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±5%以内；◎恒温箱 ? 经常检查恒温箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；◎电子天平 ? 用电子天平中自带的砝码进行较准，或用标准物件进行较准；◎酶标仪 ? 经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。; 1、实验前检查酶标仪和打印机工作是否正常。 2、试剂盒反应温度为25度或37度，要提前开空调或恒温箱，并调整好温度。 3、使用之前将所有试剂温度回升至室温25℃。使用之后立即将所有试剂放回2-8℃冰箱。 4、洗板所用水为去离子水，若没有制备去离子水的仪器，也可使用纯净水。 5、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是ELISA测定程序中的要点。在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。 ;6、反应终止液为0.5M硫酸，避免接触皮肤。 7、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号试剂盒中试剂。 8、储存条件保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻；将不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。 9、试剂变质的