第四节血涂片染色.pptVIP

甲醛的作用： ① 使ME溶解，并解离为M+和E－，这两种有色离子可以选择性地与细胞内不同成分结合而着色。 ② 因其具有强大的脱水作用，可将细胞固定为一定形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增加细胞与染料接触的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。 ① 细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合而染成红色，因此该物质称为嗜酸性物质； ② 细胞中的酸性物质如细胞核蛋白和淋巴细胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合而染成蓝色，该物质又称嗜碱性物质； ③ 中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为中性物质。 1. 制备血涂片2. 染色 待血涂片干透后，用蜡笔在两端划线，以防染色时染液外溢，然后将玻片平置于染色架上，滴加染液3～5滴，使其快速盖满血涂片，约0.5～1min后，滴加等量或稍多的缓冲液，用洗耳球对准血片吹气，使染液充实混合。3. 冲洗 室温染色5～10min后用水流冲去染液，待干。 【染色结果分析】 1. 染色适宜的血膜，外观呈淡紫红色，显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处略有碟状感。白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。 2. 染色偏红则红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。 3.染色偏碱则所有细胞呈灰蓝色，嗜酸性颗粒可染成暗褐色，甚至染紫黑或蓝色；中性颗粒偏粗，染成紫黑色。 职业教育医学检验技术专业教学资源库 第一章 血液一般检验 第四节 血涂片染色 一、血涂片染色 血涂片染色是为了使血细胞着色，染料将细胞的胞膜、胞质、胞核等染成不同的颜色，便于在显微镜下观察识别。 （一）方法 1．瑞特染色法 （1）染色原理：细胞的着色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。 （2）试剂 ①瑞特染液 酸性染料伊红（伊红化钠 ） 碱性染料美蓝（氯化美蓝） 复合物溶于甲醇。 ②磷酸盐缓冲液（PBS） （pH6.4～6.8） （3）简要操作 血涂片制备 干燥、标记 加瑞特染液覆盖血膜 固定约 1 分钟 加等量缓冲液 混匀→静置 5～10 分钟 流水冲洗、干燥 （4）染色效果 正常情况下，经瑞特染色后血膜外观呈淡紫红色。 显微镜下：红细胞呈粉红色圆盘状；白细胞的细胞核染紫红色，核染色质结构清楚，胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色；血小板染成紫红色。 2．吉姆萨染色法 （1）原理：吉姆萨染色原理与瑞特染色相同，但提高了噻嗪类染料亚甲蓝的质量，加强了天青的作用。与瑞特染色法比较，该法对细胞核着色效果较好，但对中性颗粒着色较差。 （2）试剂：由吉姆萨染料、甲醇和甘油组成。 （3）简要操作：同瑞特染色法。 3．瑞-吉复合染色法 可取长补短，使血细胞获得满意的染色效果。 （二）质量保证 1．瑞特染液质量 在密封条件下，贮存时间愈久， 亚甲蓝转化的天青 B 愈多，染色效果愈好。 可用吸光度比值（RA）作为瑞特染液的质量评价指标RA=A650/A525， RA 降至 1.3±0.1即可使用。 瑞特染液需适当加入甘油，密封严实，以防止甲醇挥发或氧化，影响染液质量。 2．pH 如环境 pH＜PI（PI 为该蛋白质的等电点），易与酸性伊红结合，染色偏红；当环境的 pH＞PI 则带负电荷增多，易与亚甲蓝结合，染色偏蓝。 3．染色时机 血涂片干透后才能染色，否则易脱落。 4．染液用量 以刚好覆盖血膜为宜。用量过多，会造成深染；过少，会导致血涂片局部未着色，或易干使染料沉积。 5．混匀 染液与缓冲液需充分混匀，否则细胞着色不均。 6．染色时间 环境温度越低、细胞越多，染色时间越长；反之亦然。 7．冲洗 用小流水将染液冲洗干净，不能先倒掉染液再用流水冲洗，以免染料沉着于血涂片上，干扰血细胞形态观察。 8．脱色与复染 染色过深，可用甲醇或清水脱色。染色过浅，可以复染。 （二）质量保证 （三）方法学评价 甲醛的作用： ① 使ME溶解，并解离为M+和E－，这两种有色离子可以选择性地与细胞内不同成分结合而着色。 ② 因其具有强大的脱水作用，可将细胞固定为一定形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增加细胞与染料接触的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。 ① 细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合而染成红色，因此该物质称为嗜酸性物质； ② 细胞中的酸性物质如细胞核蛋白和淋巴细胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合而染成蓝色，该物质又称嗜碱性物质； ③ 中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为中性物质。