酶的作用机制.pptVIP

中间产物 2）Km与Vmax的意义 Km值 ① Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 3) Ｋm值与Ｖmax值的测定 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 　 　 ① 在底物浓度较低时，即[S]很小，Km[S] Km + [S] ≈ Km ， V = Vmax/Km[S] = k[S] 反应速度与底物浓度成正比,符合一级反应 ② 在底物浓度很高时， [S]很大 [S]Km Km + [S] ≈[S]，V = Vmax [S] = Vmax 反应速度与底物浓度无关,符合零级反应 ③ 当反应速度等于最大反应速度Vmax的一半时,即v=1/2Vmax时， Km = [S] （二）酶浓度对反应速度的影响 当[S]＞＞[E]，所有酶被底物饱和形成ES复合物。 关系式为：V = K3 [E]。 反应速度与酶浓度成正比 （三）温度对反应速度的影响 双重影响 温度升高，酶促反应速度升高； 酶的本质是蛋白质，温度升高，可引起酶的变性，从而反应速度降低 。 1. 最适pH 酶具有最大的催化活性的PH,通常称为最适pH。 2） 可逆性抑制作用 * 概念 抑制剂以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结合，使酶的活性降低或丧失；抑制剂可用透析、超滤等方法除去。 定义： 抑制剂与底物的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降低。 非竞争性抑制 　　抑制剂和底物可同时结合在酶的不同部位上，形成ESI三元复合物。形成的三元复合物不能发生化学反应。 　 竞争性抑制作用 机制: 可能是由于底物与抑制剂结合在酶分子的同一部位上，也可能是由于底物或抑制剂中的一个与酶结合后，而引起酶发生构象变化，产生不利于与另一个结合的构象 。 抑制剂↑ 无抑制剂 1/v 1/[S] 抑制剂与酶的结合部位与底物与酶的结合部位相同 ； I与S结构类似，竞争酶的活性中心； 动力学特点：Vmax不变，表观Km↑。 有竞争性抑制剂存在时，Km′是原Km的1+[I]/Ki倍，而且Km′值将随[I]的增加而增大； 抑制剂浓度越大，则抑制作用越大；但增加底物浓度可使抑制程度减小 ; 竞争性抑制的特点 * 举例 1.丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 FAD FADH2 延胡索酸 2. 磺胺药对细菌FH2合成酶的抑制 3. 抗代谢物的抗癌作用 二. 米－曼氏方程式 米氏方程的理论依据—中间产物学说 E + S k1 k2 k3 ES E + P k4 1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式(Michaelis equation)。 [S]：底物浓度 V：不同[S]时的反应速度 Vmax：最大反应速度 Ｋm：米氏常数 Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ ── 当反应速度为最大反应速度一半时 1） Km值的推导 Km＝[S] ∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 2 ＝ Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ ── Vmax：是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度成正比。 Km是酶的特征性常数，在温度、PH、离子强度恒定时， Km只与酶和底物的性质有关，与酶浓度[E]无关。 Km值表示酶与底物之间的亲和程度：Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; Km值小表示亲和程度大, 酶的催化活性高。 ② Km的意义： 同一酶对于不同底物有不同的Km值，Km最小的底物是酶的最适底物。 Km可帮助判断某代谢反应的方向和途径,催化可逆反应的酶对正/逆两向底物Km不同 —— Km较小者为主要底物 乳酸脱氢酶（1.7×10-5） 丙酮酸脱氢酶 （1.3×10-3） 丙酮酸脱羧酶（1.0×10-3） 丙酮酸 乳酸 乙酰CoA 乙醛 丙酮酸浓度较低时： 代谢哪条途径决定于Km最小的酶 一底物多酶反应 32.0 乙酰酪氨酰胺 12.0 甲酰酪氨酰胺 2.5 苯甲酰酪氨酰胺 胰凝乳蛋白酶 0.058 6-磷酸-葡萄糖 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 0.006 6-N-乙酰葡萄糖胺 溶菌酶 25 尿素 脲酶 Km(mmol/L) 底物 酶 Vmax[S] Km+[S] V = （林－贝氏方程）