课题6--血红蛋白的提取与分离(学案).docVIP

PAGE 第 PAGE 17 页 课题6 血红蛋白的提取和分离 一、达标 （一）知识目标 知识与技能: 1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 过程与方法: 体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤 情感态度与价值观: 初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神 （二）重点和难点： 重点: 凝胶色谱法的原理和方法 难点: 样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 二、基础知识 （一）原理 1．凝胶色谱法 凝胶色谱法也称做 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由 构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质 进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ；而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 具体过程： 凝胶颗粒 凝胶颗粒 相对分子质量较小的蛋白质 相对分子质量较大的蛋白质 （1） （2） （3） （4） （5） B A 多孔板 A． 的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒内部而被滞留； 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。 B．（1） 混合物上柱； （2）洗脱开始， 的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内； 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外； （3） 的蛋白质被滞留； 的蛋白质被向下移动。 （4） 不同的蛋白质分子完全分开； （5） 的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来， 的蛋白质还在行进中。 2．缓冲溶液 缓冲溶液的作用是 。缓冲溶液通常由 溶解于水中配制而成的。生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，例如：血浆的pH是 ，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH与体内的基本一致。 思考：说出人体血液中缓冲对？ 思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 3．电泳 （1）概念：电泳是指 。 （2）原理：许多重要的生物大分子，如（ ）等都具有（ ） 在（ ）下，这些基团会带上（ ） 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其（ ）移动。电泳利用了待分离样品中各种分子（ ）以及分子本身（ ）、（ ）的不同使带电分子产生不同的（ ），从而实现样品中各种分子的分离。 两种常用的电泳方法是 和 ，在测定蛋白质分子量时通常使用 。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 以及 等因素。 4．蛋白质的提取和分离 蛋白质的提取和分离一般分为四步： 、 、 和 。 思考：是否所有种类的蛋白质的提取和分离都是这样的？为什么？ 5．样品处理 血液由 和 组成，其中红细胞最多。红细胞具有 的特点。红细胞中有一种非常重要的蛋白质 ，其作用是 ，血红蛋白有 个肽链组成，包括