第11章-重组DNA技术的应用.pptVIP

（四）心血管疾病 目前心血管疾病中基因治疗最多的临床方案为外周血管疾病造成的下肢缺血，及心脏冠状动脉阻塞造成的心肌缺血。通过转移血管内皮细胞生长因子（VEGF）或成纤维细胞生长因子（FGF）或血小板衍生生长因子（PDGF）等基因于血管病疫部位，通过这些因子的表达，以促进新生血管的生成，从而建立侧肢循环，改善血供。 六、问题及展望 基因疗法作为一种新兴的治疗技术无疑是近30年来生命科学发展的一种结果。 时代在发展，科技在进步，理论在创新，高科技研究成果的出现如同任何新生事物的诞生一样，运用合理，将有无限的生机与活力；应用不当，也会给人类造成极大的隐患。 随着分子技术的飞速发展，期望基因治疗会有一个美好的前景，实现真正的临床突破，造福人类指日可待。 由病毒、衣原体、支原体、立克次体、细菌、真菌、螺旋体、原虫、蠕虫等引起的疾病称为感染性疾病（infectious diseases）。感染性疾病中具传染性并可导致不同程度流行则又称传染病（communicable diseases，contagious diseases）。 第三节 传染病的防治 一、新发和再发传染病的特征 传染病的致病因素是有生命的病原体，它在人体内发生、发展的过程与其他致病因素所造成的疾病有本质上的区别，主要表现在： ①有病原体：每一个传染病都是由特异性的病原体所引起的； ②有传染性：这是传染病与其他感染性疾病的主要区别。 ③有流行病学特征：传染病的流行过程在自然和社会因素的影响下，表现出各种特征。 ④有感染后免疫：动物、人体感染病原体后，无论是显性或隐性感染，都能产生针对病原体及其产物(如毒素)的特异性免疫；⑤大多数传染病都具有该种病特征性的综合症状和一定的潜伏期和病程经过。 二、传染病防治的新策略及研究内容 1.研究流行性传染病的快速诊断技术 基因型是遗传特征，相当稳定可靠，可以作为病原体鉴定和诊断的重要依据。通过从基因水平上进行检测，可进行早期诊断，并可直接探知病原体在体内的消长过程及其与机体相互作用而致机体损害的细节，从而在疾病表现型出现之前或早期采取相应的防治措施。 2.疫苗的研究 防治传染病最有效、最经济的方法是对易感人群进行预防接种。利用DNA重组技术为基础的各类工程疫苗有望成为防治传染病的重要手段。 第十一章 重组DNA技术的应用 第一节 DNA与疾病诊断 一、基因诊断的含义 基因诊断（gene diagnosis）是基于基因与疾病的相互关系，利用现代生物学和分子遗传学的技术方法，直接从DNA水平上来探测基因的存在，分析基因的类型和缺陷及其表达功能是否正常，从而达到诊断疾病的一种方法。 二、基因诊断的原理及特点 （一）基因诊断的原理 （二）基因诊断的特点 与传统的诊断方法比较，基因诊断有以下几个特点： （1）以探测基因为目标，属于“病因诊断”，针对性强、特异性高； （2）由于检测技术十分敏感，故诊断灵敏度相当高； （3）由于基因探针或引物可为任何来源，任何种类，所以适应性强，诊断范围广； （4）在感染性疾病的基因诊断中，不仅可检出正在生长的病原体，也能检出潜伏的病原体；既能确定既往感染，也能确定现行感染；既能诊断普通菌株或病毒，也能检出变异株；同时，能对那些不容易体外培养（如产毒性大肠杆菌）和不能在实验室安全培养（如立克次体）的病原体作出诊断，所以大大扩大了诊断范围。 三、基因诊断的方法 以核酸分子杂交、聚合酶链反应（PCR）和序列分析为基础,建立了多种多样的检测方法。 1 DNA诊断 常用检测致病基因结构异常的DNA诊断方法有下列几种： ⑴ 斑点杂交：DNA样品的溶液被点在滤膜上，变性、中和、干燥固定等。标记的探针直接和滤膜上的核酸杂交，再用放射自显影或其他方法检测杂交结果。 ⑵ 等位基因特异的寡核苷酸探针（Allele-specific Oligonucleotide Probe，ASO Probe）杂交：根据点突变位点上下游核苷酸序列，合成约15-20个左右的寡核苷酸片段，其中包含发生突变的碱基，经放射性核素或地高辛标记后作为探针，在严格杂交条件下，只有该点突变的DNA样本，才出现杂交点，即使只有一个碱基不配对，也不可能形成杂交点。 ⑶ 单链构象多态性（single strand conformation polymorphism, SSCP）：是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法。 ⑷　限制性内切酶图谱（restriction map）：如果DNA突变后改变了某一核酸限制性内切酶的识别位点，使原来某一识别位点消失，或形成了新的识别位点，那么相应限制性内切酶片段的长度和数目会发生改变。 ⑸ 限制性片段长度多态性（restriction fragment length poly