1第一章蛋白质化学11.ppt

1955年Sanger用此法首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序 2，4-二硝基氟苯反应的应用 多肽或蛋白质+ DNFB DNP-多肽或DNP-蛋白质 酸水解 DNP-氨基酸+氨基酸 乙酸乙酯抽提 DNP-氨基酸 色谱分析 鉴定出多肽N-端氨基酸的种类和数目 (4) 与 5一二甲氨基萘-1-磺酰氯（dansyl chloride,DNS-Cl）的反应 （有强荧光） (5) 与苯异硫氰酸（酯）的反应 PITC PTC-氨基酸 PTH-氨基酸 The Edman degradation 苯异硫氰酸（酯）反应的应用 蛋白质自动顺序分析仪就是根据Edman 降解法的原理而设计的 (6)与亚硝酸的反应 应用：1、是Van Slyke氏测定氨基氮的理论基础 2、可用来判断蛋白质的水解程度 肽（peptide） 两个或两个以上的氨基酸通过酰胺键(或称肽键)相连而成的化合物叫作肽。 二肽 三肽 四肽 寡肽（oligopeptide） 多肽（Polypeptide） 十肽 肽如何命名？ 丙氨酰甘氨酰亮氨酸 Ala－Gly－Leu (or Ala?Gly?Leu) 1．谷胱甘肽(glutathione, GSH) 2GSH GSSG -2H +2H 天然存在的某些活性肽 γ-肽键 2．多肽激素 3．脑肽 甲硫氨酸脑啡肽 H-Tyr–Gly–Gly–Phe- Met-OH 亮氨酸脑啡肽 H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH 思考题 (1) 组氨酸的pK1(α-COOH)是1.82，pK2(咪唑基) 是6.00，pK3(α-NH3+)是 9.17，它的等电点 是 。 (2) 实验测得一蛋白质样品的含氮量为12.89%， 该样品的蛋白质含量为 。 (3) 在pH=6时将一个Ala、Arg、Glu的混合液进行 纸上电泳，移向正极的是 ，移向负极的 是 ，留在原处的是 。 思考题 (4)天然蛋白质中不存在的氨基酸是（ ） A . 鸟氨酸； B.羟脯氨酸； C.半胱氨酸; D. 甲硫氨酸； E.丝氨酸 (5)下列关于谷胱甘肽的叙述中，错误的是 ( ) A.有一个易被氧化的侧链基团； B. 有一个与通常肽键不同的γ-肽键； C. 是一种碱性肽; D.它的氧化型是六肽 (6) 多肽序列自动分析仪是根据（ ）的原理设计的。 A . DNFB法； B. DNS-Cl法； C. 氨肽酶法; D. PITC法； E. 羧肽酶法 思考题 (7)蛋白质中的氨基酸均含不对称的α碳原子 ( ) (8)氨基酸为氨基取代的羧酸，可以直接用酸碱滴定法进行定量测定 ( ) (9) 生物界中不存在任何的D-型氨基酸 ( ) (10)某氨基酸晶体溶于pH=7的水中，所得溶液的pH为6，该氨基酸的pI是大于6还是小于6？ (11) 计算下列肽的等电点： A:天冬氨酰甘氨酸： 末端-COOH (pK=2.10),末端-NH3+ (pK=9.07),β-COOH (pK=4.53) B:谷胱甘肽： Glu末端-COOH (pK=2.12),末端-NH3+ (pK=8.66),甘氨酸-COOH (pK=3.53),-SH (pK=9.62) C:丙氨酰丙氨酰赖氨酰丙氨酸： 末端-COOH (pK=3.58)，末端- NH3+ (pK=8.01)，ε- NH3+ (pK=10.58) 蛋白质的结构 一级结构 二级结构 三级结构 四级结构 一级结构 二级结构 超二级结构 结构域 三级结构 四级结构 蛋白质的一级结构（primary structure） 蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序（sequence）和二硫键的位置，一级结构的主要连接键是肽键和二硫键。 1969年正式将蛋白质的一级结构定义为: Amino acid sequences have direction. Amino acid sequence of bovine insulin. A 链：21 aa B 链：30 aa The formation of a disulfide bond from two cysteine residues is an oxidation reaction. 一级结构的测定 6、测定每一肽片段的氨基酸序列，推断出完整的肽链的氨基酸序列 1、纯化蛋白质样品，测定其分子量； 2、水解蛋白质样品，测定其氨基酸组分； 3、末端分析，确定肽链数目，及末端氨基酸； 4、拆分肽链；