全血RNA提取步骤.docVIP

Trizol法提取全血总RNA 实验前准备： Trizol，氯仿，异丙醇，75%乙醇（用RNase-Free水配制），RNase-Free水，柠檬酸钠抗凝管。 1ml注射器，1.5、3 ml EP管（DEPC处理过），大、中、小号枪头（DEPC处理） 150~250 ul全血 加入10倍体积TRIzol（主要是异硫氰酸胍）（1.5 ml~2.5 ml），充分吹打混匀，室温静置5min（使核酸蛋白复合物完全分离）。 每1毫升的TRIzol试剂加入200 ul的氯仿（300 ul~500 ul），静置3min，离心12000g，4℃，15min。 将上层水相转移到1.5 ml EP管中，加500 ul的异丙醇，上下颠倒混匀10 s，室温静置10min，离心12000 g，4℃，10 min，弃上清。 加入1 ml的75%乙醇，上下颠倒混匀10 s，离心7500 g，4℃，10 min，弃上清。 室温下干燥5-10 min（充分干燥不好溶解），加入50 ul的RNase-free-water充分溶解RNA。 分光光度计测OD值。 （取2μl进行电泳，其余-80℃保存？） #加入TRIzol后可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理