现代分离方法与技术第7章 制备色谱技术.pptVIP

第7章 制备色谱技术 7.1 制备薄层色谱技术 7.2 常规柱色谱技术 7.3 加压液相色谱技术 7.4 逆流色谱法 7.5 超临界流体色谱法 7.6 模拟床移动色谱法 7.7 制备气相色谱法 7.8 径相色谱法 7.9 顶替色谱法 7.10 离子交换与吸附 7.1 制备薄层色谱技术 点样 样品溶液的制备 点样设备和技术 样品溶液的制备 a纯品溶解-用溶剂溶解至一定浓度 b样品的提取与净化 ① 单一溶剂提取法 ② 液液萃取法 ③ 液固萃取法—过柱子 ④ 特殊的薄层板—带浓集区的薄层板分离，得到浓集的窄带 ⑤ 衍生化作用 ⑥ 原位反应法 点样设备和技术 点样方式、点样量及点样设备的选择取决于分析的目的、样品溶液的浓度及被测物质的溶解度。 溶剂的粘度不宜过高，以便于点样，溶剂的沸点要适中，太低会改变溶液的浓度，太高不易挥发易残留导致改变展开剂的选择性，溶剂必须全部除去后方可进行展开，但避免高温加热。 点样设备和技术 点状点样 管口平整毛细管点样，样点直径不超过5 mm; d1=1-1.5 cm; d2约2 cm； 定量时用定容管点样； 展开剂 薄层色谱条件：依据被分离物质的性质（溶解度、酸碱性及极性）、吸附剂（活性、非活性）及展开剂三种因素决定。 展开剂千变万化，可以是单一溶剂、更多的是应用二元、三元或多元的混合溶剂作为展开剂。展开剂也称为溶剂系统、流动相或洗脱剂。 溶剂强度 (1) 吸附薄层色谱法 (2) 分配薄层色谱法和纸色谱法 (3) 聚酰胺薄层色谱法 (4) 离子交换薄层色谱法 (5) 凝胶薄层色谱法 溶剂强度 (1) 吸附薄层色谱法 ① 底剂：展开剂中比例较大的溶剂极性相对较小，起溶解物质和基本分离的作用。 ②调节剂：展开剂中比例较小的溶剂极性相对较大，对被分离物质有较强的洗脱力，帮助化合物在薄层上移动，可增大Rf值，但不能提高分辨率，可称为极性调节剂。 溶剂强度 (1) 吸附薄层色谱法 ③ 抑制剂：展开剂中加入少量酸、碱，可抑制某些酸碱化合物或其盐类的解离而产生斑点的脱尾，称为拖尾抑制剂。 ④其他：展开剂中有时加入丙酮等中等极性溶剂，主要是促使不相混合的溶剂混溶，并可降低展开剂的粘度，加快展速。 溶剂强度 (2) 分配薄层色谱法和纸色谱法 ①水作固定相 ②亲水有机相作固定相 ③反相分配色谱 溶剂强度 (3) 聚酰胺薄层色谱法 氢键作用 展开剂洗脱能力顺序： 水＜乙醇＜甲醇＜丙酮＜稀氢氧化铵（钠）溶液 ＜甲酰胺＜二甲基甲酰胺 溶剂强度 (4) 离子交换薄层色谱法 ①缓冲溶液 ②盐溶液 ③蒸馏水 ④上述溶液加入一些有机溶剂 溶剂强度 (5) 凝胶薄层色谱法 在Sephadex-100，150，200凝胶薄层色谱板上，用磷酸缓冲液作展开剂分离蛋白 选择展开剂的方法 a三角形法 b点滴试验法 c展开室法 a 三角形法 按照展开剂、固定相及被分离物质三者的相互影响，设计了三因素的组合。 b 点滴试验法 将被分离物质的溶液间隔的点在薄层板上，待溶剂挥发后，用吸满不同展开剂的毛细管点到不同样品点的中心，借毛细管的作用，展开剂从圆心向外扩展，这样就出现了不同的圆心色谱，通过比较就可以找到最合适的展开剂和吸附剂。 7.2 常规柱色谱技术 7.3 加压液相柱色谱技术 7.4 逆流色谱法（CCC） 逆流色谱法（CCC）：基于样品在两种互不混溶的溶剂之间的分配作用，溶质中各组分在通过两溶剂相过程中因分配系数不同而得以分离。这是一种不用固态支撑体的全液体色谱方法。 DCCC (液滴逆流色谱) DCCC (液滴逆流色谱) （3）旋转小室逆流色谱 旋转小室逆流色谱 (rotational little-chambercounter-current chromatography, RLCC): 用中心有一小孔的聚四氟乙烯园盘将分离柱管分隔成若干连通的小空间，再将若干根这样的柱管排列在圆形转盘架上，柱管之间用聚四氟乙烯管串联起来。溶剂通过旋转密封接头进出这组分离柱管。所有柱管以一定的转速和倾角绕转盘中心轴转动。 流动相进入第一个小室后，就会取代其中原已注满的固定相的位置，直到流动相液面达到圆盘上小孔的水平时，流动相就会穿过小孔进入下一个小室，并依次从一根柱管进入另一根柱管。随着流动相逐步穿过各个小室，带动样品在各个小室的两相间分配。 （4）离心分配色谱和螺旋管式逆流色谱 利用离心力场实现固定相的保留，大大提高了两相溶剂的混合效率，允许使用较高的流动相流速，极大地缩短了分离时间。 根据固定相保留方式和柱体设计的不同，分为两种，一种是流体静力学平衡体系HSES,一种是流体动力学平衡体系HDES。 离心逆流色谱法：仪器工作的时分离柱要绕中心轴在设备中